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- AMEKO
- 中国
- RC01146-100ml
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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低温
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见标签
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现货
- 供应商：
联硕生物
- 规格：
100ML
2.5g 猪胰蛋白酶和0.2g EDTA溶于1升PBS。不含钙和镁，含酚红。过滤除菌
产品说明：
在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散（将组织块制备成单个细胞悬液）以及传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶，EDTA等，其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解，使组织或贴壁细胞分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。
胰蛋白酶消化液(Trypsin Solution)含0.25%胰酶，溶于无钙镁平衡盐溶液中，经过滤除菌，可以直接用于培养细胞和组织的消化。本产品具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点。通常室温消化2分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。
使用方法：
1. 贴壁细胞的消化：
a) 吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
b) 加入少量胰蛋白酶消化液，盖过细胞即可，室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同，对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。
c) 显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
d) 如果发现消化不足，可加入胰蛋白酶消化液重新消化。
e) 如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2. 组织的消化：
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
注意事项：
1．由于组织或细胞性质不同，实验人员应依据具体情况，确定最佳消化时间；消化细胞时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁和生长状况；
2．本产品不含抑菌剂，在使用过程中要特别注意无菌操作，避免消化液被微生物污染；
3．不宜4℃长期保存，切忌反复冻融，小量使用时建议分装冻存；
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多谢！答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没
动物细胞培养中Hanks液、D-Hanks液和消化液的配制方法
室一般用1：250(GRC公司生产)。胰蛋白酶对细胞的分离效果与细胞的类型、特性和瓶壁表面特性有关。一般来说浓度大、温度高(勿高于37℃)、作用时间长，则对细胞分离能力大。但超过一定程度会损伤细胞，导致细胞传代后不能贴壁或死亡。胰酶在pH 8.0、37℃时消化能力最强。溶液中的Ca2+、Mg2+和血清会降低胰酶活力，所以配制胰酶时须用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液。当消化结束时，可加入少量血清或含血清的培养基以终止胰酶作用。 细胞传代使用的胰酶浓度是0.25%或0.2%。用于原代细胞培养消化
酚红 0.02g 溶于1000ml水中 染色体的G带核型实验中胰蛋白酶用生理盐水配制。 二、EDTA溶液 又称versene，一般用其钠盐，因可溶性较好。有些组织需要Ca2+ 、Mg2+ 来保持其完整性，用EDTA来排除这些离子，可使细胞之间裂解，以分散细胞。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%，以无钙、镁的平衡
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