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文献和实验【原创】实验方法分享:用某品牌rProtein A填料有效纯化小鼠腹水单抗
很多免疫教科书上描述,人和兔子,还有猪的抗体可以用proteinA亲和纯化。小鼠腹水单抗用protein G亲和介质进行纯化。 但是在实际科研中,我们发现用新的rProtein A也可以对小鼠腹水进行有效纯化 我和不少人说起过这个事,但是还是有很多怀疑和种种疑问 挑战经典理论确实是件难事 我摘抄了实验室一次实验与大家分享,希望对大家有所帮助 简单的实验步骤,适合没有层析仪,又希望快速得到抗体的实验室(此次纯化实验耗时约2小时): 1,用binding buffer
专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。也可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质,再用以结合目标蛋白。一部即可得到高纯度样品。 三、大体积的样品、常使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品,可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理,洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。 纯化大量粗品 处理大量原液时,为避免堵塞柱子,一般使用Sepharose Big Beads、SepharoseXL
组份。 二、用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。也可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质,再用以结合目标蛋白。一部即可得到高纯度样品。 三、大体积的样品、常使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品,可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理,洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。 纯化大量粗品 处理大量原液时,为避免堵塞柱子,一般使用Sepharose Big Beads、SepharoseXL
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