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玻片芯片
小鼠标记法抗体芯片(308芯片)---玻片芯片
半定量检测308个指标
检测指标图谱:http://www.raybiotech.com/L_series_map.asp#2
一检查原理
标记法芯片是RayBiotech的L-系列芯片,L-系列芯片只需要一个捕获蛋白,它用生物素标记样品来代替标记检测抗体。这种模式可以检测那些没有合适的抗体对来建立ELISA检测的分析物。因为溶液中没有自由的检测抗体与其他抗体相互作用产生干扰试验,基于抗体相互作用产生的交叉反应就可以避免,所以引入新的抗体到标记芯片上比较容易,一个芯片上可以有几百个甚至几千个抗体。标记法芯片适合于大批量的筛选试验,且标记法芯片节省时间和操作步骤。
二、试剂盒内容
- 膜芯片
- 标记试剂(1管)---Labeling Reagent
- 内参---Internal control
- 终止液----Stop Solution
- 封闭缓冲液---1X Blocking Buffer
- 500X 的HRP-链霉亲和素---1,000X HRP-Conjugated Streptavidin
- 20X的洗液I ---20X Wash Buffer I
- 20X 的洗液II---20X Wash Buffer II
- 2X 的细胞裂解液---2X Cell Lysis Buffer
- 检测缓冲液C---Detection Buffer C
- 检测缓冲液D---Detection Buffer D
- 透析柱---Spin Column
- 孵育板---Plate
三、结果扫描
RayBiotech 的芯片共有2种载体,一种是膜载体,一种是玻片载体。
1. 膜载体,就类似于Western Blot 实验采用的NC膜或PVDF膜,采用ECL化学发光作为显色信号,这种膜载体相对玻片载体使用时,需要等多一些样品用量,但凡是可以用于WB实验室的都可以使用RayBiotech的膜芯片,通用性高。
2. 玻片载体,是采用载玻片一样的玻璃片作为芯片载体,用Cy3或Cy5,绿色荧光信号作为显色信号,样品用量少,但需要与基因芯片通用的荧光扫描仪。
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文献和实验光报告分子,常用的荧光扫描仪都能够完成。第一代的蛋白芯片和DNA芯片一样是作为一种定性分析的工具,可用于分析样品之间相关蛋白的相对表达丰度;还可以作为DNA芯片的补充,用于研究蛋白和基因表达之间的关系。操作流程Ab Microarray 380抗体芯片并不要求特殊的实验操作,只要一般常规的操作就可以完成以往极为复杂耗时的工作。整个操作流程包括:从50~200mg组织或细胞、体液中进行蛋白质抽提——用Cy5和Cy3两种不同颜色的荧光分子分别标记两个样品——洗去多余的标记分子——与芯片杂交孵育——扫描分析
芯片的构建和阅读摘要制作芯片和获得芯片的数据有许多不同的方法。这里我们介绍了在学术领域中两种芯片的构建和使用。除了详细说明了技术细节外,我们还对组成和方法的优缺点进行了评论,同时还介绍了杂交的方法。用我们所建立和使用芯片的方法来回答生物领域问题的事实证明了这种技术在大学的环境下是可行的。一种获得基因功能信息的高通量的方法是cDNA芯片。在一块显微镜载玻片上包含了几百至几千个固定的DNA样本,以类似于Northern blot 和Southern blot的方法进行杂交。了解了这个方法
,载玻片在使用前需要进行表面处理,目的是抑制玻璃片表面对核酸分子的非特异性吸附作用。常用的表面处理方法有氨基化法、醛基化法和多聚赖氨酸包被法。 cDNA芯片的制备:制备cDNA芯片多用合成后点样法(Spotting after synthesis),简称点样法。合成后点样法使用的专用设备称为点样仪(Arrayer),目前有多家国外公司(如Bopdiscovery,Biorobotics,Vartesian Technologies,Genetic Microsystems
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