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- 百奥莱博
- QN4066-TXF
- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
94
- 英文名：
Glutathione Sepharose 4FF
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格：
10ml
特别提示：包括谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4FF在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4FF
英文名称：Glutathione Sepharose 4FF
产品货号：QN4066
产品规格：10ml
pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。
技术参数：
粒度：45～165µm
流速：75cm/h
工作PH：pH4.0～10.0
耐压：0.3Mpa
载量：＞10mg谷胱甘肽S-转移酶
使用说明：
一、谷胱甘肽树脂的处理：
1．轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
2．取部分匀浆放入15mL聚*烯管（每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆）。
3．4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
4．在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
5．每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。
二、制备细胞抽提物：
6．每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
7．加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
8．用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟，4℃ 3000g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。
三、纯化融合蛋白：
9．细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。
10．混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚*烯酰胺凝胶电泳。
11．沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
12．4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚*烯酰胺凝胶电泳。
13．重复步骤11和12两次。
14．结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
四、用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
16．4℃以500g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。
17．重复步骤a和b两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mL PBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2～16小时。用小规模实验确定精确时间。
19．4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
20．10% SDS聚*烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。
试剂配制：
谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)
除了谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4FF,，我公司还供应以下相关产品：
| 货号 | 名称 | 规格 |
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| QN4054 | 蛋白G琼脂糖凝胶亲和层析介质 | 2ml|10ml |
| QN4060 | 明胶-琼脂糖凝胶4FF | 25ml |
| QN4061 | 羧基-琼脂糖凝胶4B | 25ml |
| QN4062 | 苯甲脒-琼脂糖凝胶4FF | 25ml |
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| QN4065 | 谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P. | 10ml |
| QN4066 | 谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4FF | 10ml |
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| QN4073 | 丁基-琼脂糖凝胶4B | 25ml |
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| QN4089 | 辛基-琼脂糖凝胶4FF | 25ml |
| QN4093 | CM-琼脂糖凝胶FF | 100ml |
| QN4098 | 琼脂糖凝胶6B | 100ml|500ml |
| QN4104 | 葡聚糖凝胶G-50 | 25g|100g|500g |
| QN4108 | 葡聚糖凝胶G-15 | 25g |
| QN4109 | 葡聚糖凝胶G-10 | 25g |
| GH1034 | 双交联琼脂糖凝胶6B FF | 100ml/200ml |
| GH1039 | 琼脂糖凝胶4B | 100ml/200ml |
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文献和实验到纯化的问题，大大简化了纯化的步骤，但还是会遇到些实际的问题，所以需要详细阅读使用说明和注意事项。(一)HIS 标签重组蛋白可以很方便用镍琼脂糖凝胶FF 分离，色谱填料已经螯合好了镍离子，使用非常方便，吸附载量更高，特异性更强，可以选择多种洗脱方式，是纯化这类融合蛋白的最佳工具。(二)ST 融合蛋白在表达时同时表达了谷胱甘肽s 转酶，很方便用GST 琼脂糖凝胶FF 分离，然后再用肠激酶或凝血酶等酶解就得到表达的产物。而凝血酶可以用肝素琼脂糖凝胶FF 或苯甲脒琼脂糖凝胶FF 分离。(三)白A 融合
亲和的方法把它们和杂蛋白分离。 7. 纯化重组蛋白 重组蛋白构建已经考虑到纯化的问题，大大简化了纯化的步骤，但还是会遇到些实际的问题，所以需要详细阅读使用说明和注意事项。 (一) HIS标签重组蛋白可以很方便用镍琼脂糖凝胶FF分离，色谱填料已经螯合好了镍离子，使用非常方便，吸附载量更高，特异性更强，可以选择多种洗脱方式，是纯化这类融合蛋白的最佳工具。 (二) ST融合蛋白在表达时同时表达了谷胱甘肽s转酶，很方便用GST琼脂糖凝胶FF分离，然后再用肠激酶或凝血酶等酶解就得到表达的产物
40个循环 94℃30s 两个温度50℃/55℃30s 72℃45s 72℃10min 取扩增样20μl，用1.2%琼脂糖凝胶电泳来分析扩增结果。不用甲醛变性胶，普通琼脂糖凝胶即可。 用特异性5’和3’引物PCR失败，改用oligodT代替特异性3’引物后得到的片断小于目的片断，分析认为是RNA二级结构严重，尝试65℃保温消除二级结构的方法进行RT-PCR，即将特异性引物和总RNA混合后先65℃保温10分钟，再加
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