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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
T Simple vector ligation Kit
- 库存:
956
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆位点)折扣价由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆位点)等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。
名称:T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆位点)折扣价
产地:国产|进口
编号:ALH347
规格:20次|60次
本试剂盒T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。这种载体是由pBlueScript II SK(+)质粒改建而成,和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同,T Simple载体通过改造pBlueScript II SK(+),在原pBlueScript II SK(+)多克隆位点引入 Xcm I酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基,因此有更高的重组效率。同时它消除了pBlueScript II SK(+)载体上的多克隆酶切位点,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时,酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。此外,本公司载体连接体系还有背景低(蓝斑小于10%),重组率高(白斑中超过90%有插入片段),可快速连接等特点。本说明书末列出了T Simple 载体相关的技术资料,其全序列可参照pBlueScript II SK(+)序列,只是其多克隆酶切位点处序列稍有不同。
试剂盒组份:
T Simple Vector(30ng/μl)———————20μl
1000bp Control(30ng/μl)-——————5μl
10×PEG Enhancer-———————————50μl
10×Ligation Buffer-—————————40μl
2×Quick Ligation Buffer-———————100μl
T4 DNA ligase(5Uμl)—————————20μl
储存条件:-20℃。
本品别名:T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆位点)|T载体克隆试剂盒
关于T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆位点)折扣价的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·RNA保存液(长期保存RNA)
编号:ALH062
英文名称:RNA long-term preservation solution
规格:2ml
本品可以允许RNA在4℃过夜或-20℃保存至少1 年而免于降解。RNA 长期保存液是RNA 样品运输和中长期保存的最佳选择。需要时可用常规乙醇法沉淀回收RNA,或直接吸取储存于RNA 溶解保护液中的高浓度RNA(可达4 mg/ml)进行RNA 电泳、Northern Blot。
用RNA长期保存液溶解RNA沉淀:
1. 对固体RNA 沉淀,每0.4-4μg RNA 沉淀加入1μl RNA 长期保存液,反复吹打混匀或者室温振荡15-30 分钟溶解沉淀。干燥的RNA 沉淀难以溶解,可反复吹打混匀后50℃加热10-15 分钟。最好先用小体积无RNase 的TE 或水溶解RNA沉淀,然后按液态RNA 操作。
2. 对液态RNA 溶液,每0.4-4μg RNA 溶液加入1μl RNA 长期保存液,混匀。注意混合液中RNA 长期保存液的体积百分比不低于80%。
3. 测定OD 值。注意加入相应量的RNA 长期保存液做空白。
4. 将溶解的RNA 样品储存于-20℃或者-70 ºC。
从RNA长期保存液中沉淀RNA:
1. 估计RNA 溶液终体积。加入4 倍体积的无水乙醇,混匀。如果溶液体积过小操作不便,可加入RNase free water 稀释RNA 溶液,如果溶液中RNA 含量低于
0.25μg/μl,可加入5M NaCl(RNase free) 至终浓度0.2M,混匀,然后再加入4 倍体积乙醇。
2. 室温放置5 分钟。
3. 12000rpm,5 min。弃上清。风干,溶解。
4. 重新沉淀的RNA 溶解后可用于RT-PCR 反应。也可用于任何其他实验。
直接使用RNA长期保存液中的RNA:
直接吸取RNA长期保存液中的RNA,进行普通或甲醛变性电泳和Northern Blot。进行甲醛变性电泳时,最后上样的样品中的RNA长期保存液的浓度可高达50%。
附:甲醛变性电泳样品准备: 临用前,混合水(87μl),甲醛(81μl), 50%甘油/含0.25 mg/ml *芬兰(48μl) 和20X MOPS (24μl). 将上述混合液和RNA 长期保存液中的RNA 样品等体积混合,55℃温育10 分钟,按照标准的甲醛变性电泳过程上样。
注意事项:
1. RNA 长期保存液可能抑制逆转录酶活性,做RT-PCR 反应前应该用乙醇沉淀RNA。
2. 在RNA 长期保存液中的RNA 的终浓度不应该超过4μg/μl。
储存条件:4℃
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·细胞组织总RNA提取试剂
编号:ALH001
英文名称:Total RNA extraction reagent From Tissue or Cell
规格:50ml|100ml
本试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入*仿后离心,样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后,RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后,样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
无论是人、动物、植物还是细菌组织,该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。本试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。本试剂抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR,当两条引物位于单一外显子内时,建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。
本试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用*化乙啶染色,可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
储存条件:室温,有效期12个月。
注意事项:
1. 当本试剂用量少于2ml时建议使用清洁的一次性的聚丙材质试管。
2. 当本试剂用量较大时,可以使用玻璃试管(Corex)或聚丙材质试管,事先检验以确保该试管可以耐受加入本试剂和*仿后12,000×g的离心力。不可使用有裂缝或者破损的试管。
3. 离心前小心平衡试管。
4. 离心前玻璃管口必须盖上铝箔并用石蜡膜封口,聚丙*(代"烯")管必须盖紧。
5. 从少量的组织(1~10mg)或细胞(102~104)中分离RNA 样品:往组织或细胞中加入800μl 本试剂。待样品裂解后,加入*仿并进行步骤2 中的抽提操作。在用异丙醇沉淀RNA 之前,加入5~10μg 无RNA 酶的glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度在加入*仿前用26 号注射器抽吸两次以切断基因组DNA。Glycogen 会留在水样层中并和RNA 共析出。在浓缩到4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会抑制PCR。
6. 在匀化后和加入*仿之前,样品可以在–60~–70℃ 保存至少一个月。RNA 沉淀(步骤4,RNA 漂洗)溶于75%的乙醇在2~8℃ 至少可以保存一周,在–5~–20℃ 下至少可保存一年。
7. 台式离心机最大能达到2,600×g 的离心力,如果将离心时间延长到30~60 分钟可以满足步骤2 和步骤3 中的操作。
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·病毒基因组快速提取试剂盒
编号:ALH048
英文名称:Nucleic acid rapid extraction from virus
规格:50次
本试剂盒采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求, 如病毒RNA:HCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒),和HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒); 病毒DNA:HBV(乙肝病毒)和CMV(巨细胞病毒)等等。病毒裂解后,DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR/RT-PCR分析。
试剂盒组分:
裂解液VLB————————20 ml
去蛋白液RE———————25 ml
漂洗液RW————————10 ml
RNase-free H2O—————10 ml
吸附柱和收集管————50套
产品特点:
1.不需要使用有毒的*酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒DNA/RNA 纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种常规操作,包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
操作步骤:
提示:第一次使用前请先在10ml 漂洗液RW 中加入40ml 无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 200μl 血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9% NaCl 或者PBS 补足)转入上述1.5ml 离心管,加入400μl 裂解液VLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。
2. 室温(15-25℃)放置10 分钟,每隔5 分钟,振荡混匀一次。
3. 加入450μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
4. 将上述混合物加入一个吸附柱 中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm 离心30-60 秒,倒掉收集管中的废液。如果总体积超过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱中。
5. 加500μl 去蛋白液RE,12,000rpm 离心30 秒,弃废液。
6. 加入500μl 漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30 秒,弃废液,加入500μl 漂洗液RW,重复一遍。
7. 将吸附柱 放回空收集管中,13,000rpm 离心2 分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
储存条件:室温,有效期12个月。
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