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- 上海谷研
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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
详见说明书
- 细胞类型：
详见说明书
- 肿瘤类型：
详见说明书
- 供应商：
上海谷研
- 库存：
48
- 英文名：
Rat Brain PrimaCell: Normal Brain Meningeal Fibroblasts
- 生长状态：
贴壁；悬浮
- 年限：
详见说明书
- 运输方式：
常温运输/干冰运输
- 器官来源：
详见说明书
- 是否是肿瘤细胞：
详见说明书
- 细胞形态：
详见说明书
- 免疫类型：
详见说明书
- 物种来源：
人/小鼠/大鼠/其他
- 相关疾病：
详见说明书
- 组织来源：
详见说明书
- 规格：
1.2ML/1.5ML
1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement
2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO
3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S
4、染色液： 0.4% Trypan Blue
5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit
6、检测试剂：鼠抗人及大鼠desmin一抗，肌球蛋白（myosin）单克隆抗体
大鼠脑膜成纤维细胞培养试剂盒规格【Rat Brain PrimaCell: Normal Brain Meningeal Fibroblasts】
脑是中枢神经系统的主要部分，位于颅腔内。低等脊椎动物的脑较简单。人和哺乳动物的脑特别发达，可分为大脑、小脑和脑干三部分。其中，大鼠脑膜成纤维细胞是结缔组织中最常见的一种细胞，主要功能是在组织创伤后修复组织。大鼠脑膜成纤维细胞传10代仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。 利用本公司试剂盒中提供的脑组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的脑组织能使得脑组织中成纤维细胞的一些功能特性发生改变，从而将成纤维细胞分离开来。
本试剂盒适用于分离培养大鼠脑膜成纤维细胞。本体系提供了最佳的组织分离条件，分离单个细胞的效率是已出版文献中所报道的5~6倍。此外，本体系还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。 大鼠脑膜成纤维细胞培养试剂盒适合于培养大鼠的成纤维细胞。本试剂盒包含： （1）OptiTDSTM大鼠脑膜成纤维细胞组织解离液（3×1ml） （2）大鼠脑膜成纤维细胞组织处理缓冲液（100ml） （3）大鼠脑膜成纤维组织洗液(5 x 100 ml) （4）大鼠脑膜成纤维细胞生长因子（1ml500X）及血清（5x10ml） （5ᰀ
服务特点：
1. 大鼠脑膜成纤维细胞培养试剂盒规格细胞纯度高：原代分离得到的目的细胞最高纯度可达到95%以上；
2. 细胞活力强：原代分离的细胞一般不能长久传代，提供P0-P3代的细胞，活力达80%以上，无污染；
3. 多种鉴定方式：可根据需求提供流式细胞检测、免疫细胞化学、Realtime PCR及蛋白印迹等多种检测方法。
原代细胞分离：
一、大鼠脑膜成纤维细胞培养试剂盒规格细胞培养
1取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。2培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏（可参阅后面有关章节）为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
二、原代细胞分离
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。2实体组织材料的分离方法对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。
三、细胞增殖检测技术
目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂
的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然，细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。所以最直接的证据应该采用方法一。
其中常见检测：CCK8检测法 ，MTT检测法，Brdu检测法，Edu检测法，平板克隆形成。
四、细胞周期检测技术
细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。
常用的方法：流式检测细胞周期，标记有丝分裂百分率法。
五、细胞凋亡检测
常见检测方法：流式检测细胞凋亡，线粒体膜电位，活性氧检测，Hoechst染色，电镜，TUNEL。
六、细胞转移能力检测
常见检测方法：细胞划痕实验，Transwell实验，Invasion实验
实验操作：
1、 大鼠脑膜成纤维细胞培养试剂盒规格新生小鼠拉颈椎处死，乙醇消毒腿部，在超净工作台内，取肌肉于平皿，Hank’s洗3次，剔除脂肪、结缔组织，将肌肉标本剪约0.1cm3小块；
2、 将剪碎的肌肉移至离心管，Hank’s洗3次，静置1min，弃去上层液及漂浮组织
3、 向上述离心管中加入0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次离心管，然后加入生长培养基终止消化；
4、 反复吹打后，依次100，200，400目过筛，滤液收集后，1000r/min离心10min；
5、 弃去清夜，用生长培养基重悬细胞，悬液加入未经PPL包被的培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度培养1h后，转移包被瓶中，生长培养基培养，4d换液，以后每天换液1次。
氯铵-T三水(>98%,BR)Chloraminetrihydrate
氯吡格雷Clopidogrel质量规格：美国进口
氯吡格雷标记d4Clopidogreld4
氯吡格雷硫酸氢盐Clopidogrelsulfate
氯吡格雷相关化合物BRelated
氯吡嘧磺隆（标准品）Halosulfuron-methyl质量规格：分析标准品,99.5%
氯吡脲（标准品）Forchlorfenuron质量规格：分析标准品
氯吡脲；氯吡苯脲；吡效隆Forchlorfenuron,4-CPPU,CPPU,KT-30质量规格：>98%,BR
氯波必利（标准品）Clebopride质量规格：UV法含量测定
氯草定(标准品)Nitrapyrin质量规格：分析标准品
氯代丁二乙酰亚胺(>98%,BR)NCS,128-09-6
氯氮平（标准品）Clozapine质量规格：HPLC>98%,标准品
氯氮平Clozapine质量规格：>99%
氯地孕酮Chlormadinone质量规格：美国进口
氯碘羟喹（标准品）Clioquinol质量规格：HPLC含量测定
大鼠脑膜成纤维细胞培养试剂盒规格肺α/β水解酶蛋白1抗体 订购|咨询
水解酶结构域蛋白13抗体 订购|咨询
水解酶结构域蛋白14B抗体 订购|咨询
水解酶结构域蛋白15抗体 订购|咨询
肺α/β水解酶蛋白3抗体 订购|咨询
三磷酸腺苷结合盒转运蛋白F亚基3抗体 订购|咨询
三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A亚基5抗体 订购|咨询
ADCK1蛋白抗体 订购|咨询
酰基辅酶A结合结构域蛋白4抗体 订购|咨询
α/β水解酶4抗体 订购|咨询
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文献和实验瓶倾斜放置在温箱中，干贴壁2-4 h后，将培养瓶慢慢翻转平放，继续静置培养。注意上述操作过程中动作要轻柔，让液体慢慢覆盖组织小块，严禁动作过快致使液体产生的冲力使粘贴的组织块漂起而造成原代培养失败。48 h后换液，更换2-3 ml即可。 2.6 贴块贴壁72 h后，镜下可见大量的成纤维细胞爬出，将组织块去除，继续培养2-3天，待细胞长满，即可传代。注：因为血清浓度低，内皮细胞可以爬出少量，但是很快就会死掉。 2.7 传代用0.25%胰酶常规消化，以1:2传代，传代完后，采用
的[5]，但细胞得率均较低，而近些年来国外大多数方法采用以大脑皮质为材料、酶消化及梯度离心分离脑微血管段并进行原代培养[6~9,11,12]。由于原代培养中无法避免地混杂成纤维细胞、周细胞、平滑肌细胞、星型胶质细胞等其他细胞的生长，而且工作量大、过程繁琐且费用高[1]，进行较纯的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养一直是国内外的一个难点。 本人参照文献[6]、[7]、[8]的方法，成功地摸索出大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法，并获得纯度较高的脑微血管内皮细胞。 1.材料与方法 1.1 实验动物 每次
的酶、优化酶浓度和孵育时间，大部分组织都常用酶解法。 （3）组合法：即机械解离+酶解，使组织均匀充分地接触酶消化液，减少了强机械力和过长酶消化时间对细胞造成的伤害。有商品化的经过验证的解离试剂盒可以选择，搭配全自动组织解离仪，做到高效而稳定地组织解离。 5. 如何解离肿瘤组织？ 由于肿瘤组织异质性高细胞类型多（肿瘤细胞、成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞等）、细胞间连接紧密细胞外基质异常沉积、结构和微环境复杂、异常代谢等问题，肿瘤组织的解离较为困难。样本的选取需要合适，并且也要根据不同的肿瘤组织特
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