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- 百奥莱博
- GL2522-HDW
- 北京
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
451
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100T
特别提示：包括线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10法)
产品货号：GL2522
产品规格：100T
用途：
细胞凋亡的生物化学分析，线粒体膜电位检测
注意事项：
主要由JC-10染料储存液，JC-10 buffer、CCCP等组成，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位，采用FACS检测。
储存条件：-20℃，避光，12个月
除了线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10法),，我公司还供应以下相关产品：
名称：线粒体蛋白提取试剂盒
货号：SNM525
规格：100T|50T
名称：Annexin V-APC细胞凋亡检测试剂盒
货号：KFS189
规格：10T|20T|50T|100T
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素APC 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。\
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。
注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-APC/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
名称：Caspase 8活性检测试剂盒
货号：HR0430
规格：20T/50T/100T
Caspase 8活性检测试剂盒(Caspase 8 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中Caspase 8酶活性或纯化的Caspase 8酶活性的试剂盒。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 8被认为是细胞凋亡信号转导过程中比较上游的一个caspase。在Fas-receptor和TNFR-1 介导的细胞凋亡过程中caspase 8被激活，形成一个由p18和p10组成的二聚体，进一步激活下游的caspase4，caspase 6，caspase 9和caspase 10。
本Caspase 8活性检测试剂盒是基于casepase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA产生黄色的pNA，pNA在405nm 附近有强吸收，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测，可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-8检测。
储存条件：裂解缓冲液和检测液室温保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。
注意事项：
● 须自备可以测定 A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405。
● 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
● 适合采用 Bradford法进行蛋白浓度测定。
● 如果样品中蛋白含量低，裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度接近 1-3mg/ml。
● 如果样品中激活的caspase水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个caspase激活比较强的时间点进行检测。
● Ac-IETD-pNA 避光保存，使用过程中尽量避光。
● Ac-IETD-pNA溶液冻存后可能产生沉淀，使用前请混匀。
使用方法：
一、裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10μl DTT。
二、样品处理
A、细胞样品
1．收集 2-5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2．用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．在细胞中加入100μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4．置冰上 15分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
5．在 4℃，500×g条件下离心5分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
B．组织样品
1．取适量组织样本剪碎，按照 50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)，冰上静置15分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2．在 4℃，500×g条件下离心5分钟。
3．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、对上述处理过的上清用Bradford法进行蛋白定量。
四、Caspase 8活性检测
1．取10μl 大约含20-50μg蛋白的裂解上清，加入90μl检测缓冲液。
2．再加入10μl Ac-IETD-pNA(使用前请混匀)，在37℃下避光反应1-2小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育过夜。部分样品中激活的caspase-8水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。
3．测定 A405nm或A400nm。
4．根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase 8活性程度。
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文献和实验一、线粒体膜电位检测原理 线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件，发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体膜电位崩溃，细胞凋亡便不可逆转。 JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm的理想荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在状态，两者发射光谱不同。在正常细胞内，线粒体膜电位较高，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可产生红色荧光；凋亡早期，线粒体膜电位降低，JC-1不能聚集在线粒体基质中，此时JC-1为单体
染料的浓度，引起假去极化。荧光探针JC-1是一种阳离子型的亲脂性染料，能够自由穿过细胞膜，随细胞膜电位的变化而在膜两侧保持动态平衡。其特点是线粒体膜电位低时浓度低，主要以单体形式存在，488nm激发时最大发射波长为527nm，呈绿色荧光，胞浆相对线粒体为低电位，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性；膜电位高时浓度高形成聚集体，488nm激发时的最大发射波长为590nm，红色荧光。活细胞线粒体膜电位高，线粒体内JC-1聚集体的浓度高，红色荧光很强，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性，而凋亡细胞则大多
Cell：清华俞立团队首次发现迁移体介导的线粒体胞吐，一种新型线粒体质控过程
的绝大多数线粒体都是 MitoSOX 阳性的，并且通过线粒体探针 TMRM 染色证实迁移体内的线粒体已经失去了线粒体膜电位。图片来源：Cell2、肌动蛋白选择性结合受损的线粒体那么受损的线粒体如何被感知并转运到迁移体中呢？TEM 分析表明，受损的线粒体可能被选择性地转运至细胞周围。为了验证该假设，该研究首先分析了 KIF5B 和动力蛋白在分离的线粒体上的募集。研究发现，用 10 mM CCCP 处理细胞会显著降低肌动蛋白的线粒体募集并增加 KIF5B 的募集。相比之下，用 2 mM CCCP 处理
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