- ¥998 - 3650
- 康朗生物
- CAT#: KL21010
- 中国/上海
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
EHA105 Electroporation-Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
EHA105 Electro
EHA105 Electroporation-Competent Cell 产品说明书产品规格 （CAT#: KL21010）
EHA105 Elec： 50μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（12个月）
基因型
C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
产品说明
EHA105菌株由EHA101菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。开发的EHA105电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒 (size:11633 bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒（size:40 kd）检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入0.01-1 μg质粒DNA（体积不大于6ul，感受态转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天
（当平板只含有50 μg/ml kan 时，28℃培养48 h即可；平板中同时加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需28℃培养60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h）。
备注
1、农杆菌相关抗生素配方：
| 抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
| 羧苄青霉素（carb） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
| 硫酸卡那霉素（kan） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
| 链霉素（strep） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
| 利福平（rif） | DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
| 庆大霉素（gent） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
2、常用农杆菌抗性：（R：抗；S：敏感。）
| 农杆菌菌株 | 羧苄青霉素(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 庆大霉素(gent) | 硫酸卡那霉素(kan) |
| AGL-1 | R | S | R | S | S |
| EHA101 | S | S | R | S | R |
| EHA105 | S | S | R | S | S |
| LBA4404 | S | R | R | S | S |
| GV3101 | S | S | R | R | S
|
| component | LB(液体)/L | LB(固体)/L | component | YEB(液体)/L | YEB(固体)/L |
| Tryptone | 10 g | 10 g | Tryptone | 5 g | 5 g |
| Yeast extract | 5 g | 5 g | Yeast extract | 1 g | 1 g |
| NaCl | 10 g | 10 g | 牛肉浸膏 | 5 g | 5 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | 蔗糖 | 5 g | 5 g |
| Agar | － | 15 g | MgSO4*7H2O | 0.49 g | 0.49 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | |||
| Agar | － | 15 g |
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
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文献和实验Electro-elutionofnucleicacidsfromagaroseandpolyacrylamidegelslides
Principle The nucleic acids contained within the gel slice are electrophoresed
眼电图 electro－ oculogram 眼球运动的电学记录。跨网膜存在着静止电位，角膜侧为正，巩膜侧为负这可以看作在那里有一定大小的电偶极子的存在。为了检测眼球的水平运动，把一对电极分别置于眼内角和眼外角，检测垂直运动时则置于眼睑上下，记录两者的电位差。眼球向着前方时无电位差，但旋转时角膜侧电极则比另一电极偏正。若把这一电位差作放大记录可成为眼球运动的指标。在技术上还有各种困难的问题，如瞬目时会引入很大的伪迹。还有，即使作单纯的水平运动，在上下方向也出现诱导电位。
Electro-Transformation of Yeast
Electro-Transformation of Yeast David Amberg Grow cells to 1X10E8 or OD600 of 1.2-1.3. Spin cells at 5,000rpm for 5 min, and wash pellets in an equal volume of ice cold water. Wash in 1/2 volume cold water.
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