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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-70℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Origami B(DE3)pLysS
- 库存：
50
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20×100μl
感受态细胞名称: OrigamiB(DE3)pLysS, Origami B(DE3)pLysS
菌株类型: E.coli
产品目录号: 70839-3, 70839-4
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞基因型
抗性: 卡那，四环素，氯霉素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 蛋白表达, 含二硫键蛋白表达
诱导方法: IPTG
菌株特点:
Origami B系列菌株同样具有Origami系列菌株含有的trxB/gor基因突变，但是该菌株是来源于BL21的lacZY基因突变株。所以，Origami B系列感受态细胞是集合BL21，Tuner和Origami三种细胞株的优点于一身。
在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。
TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。
Origami B(DE3)感受态细胞来源于含有lacZY基因突变的BL21菌株，能够通过IPTG高效控制目的基因的表达。
DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。
含有pLSs质粒，pLySs质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。
OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。
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文献和实验）ply菌株 基因型： F- ompT gal dcm lon hsdSB（rB- mB-） λ（DE3） pLysS（cmR）. 特点： 该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性.此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达. 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达. 用途： 蛋白质表达.
ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。 特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。 用途：蛋白质表达 DH5α菌株 基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择，现系统地解答一下，供新手借鉴。
pLysS 和 pLyE 时调控会更严紧。 pLys 质粒编码 T7 溶菌酶，它是 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物，因此可降低其在未诱导细胞中转录目标基因的能力。 pLysS 宿主菌产生低量 T7 溶菌酶，而 pLysE 宿主菌产生更多酶，因此是最严紧控制的 λ DE3 溶原菌。 有 11 种不同DE3 溶原化宿主菌。使用最广泛的为 BL21 及其衍生菌株，它的优点在于缺失 lon 和 ompT 蛋白酶。 B834 菌株为甲硫氨酸营养缺陷型，因此可用 35 S- 甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行
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