- ¥998 - 3650
- 康朗生物
- CAT#: KL10402
- 中国/上海
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
NMY51 Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
NMY51
NMY51 Chemically Competent Cell 产品说明书产品规格 （CAT#: KL10402）
NMY51 Competent Cell: 100μl/支 保存： -80℃（3个月）
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存：-80℃（12个月）
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存：-20℃（12个月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： 4℃（12个月）
基因型
MATa, his3Δ200, trp1-901, leu2-3, 112, ade2, LYS2::(lexAop)4-HIS3, ura3::(lexAop)8-lacZ, ade2::(lexAop) 8-ADE2, GAL4
产品说明
DUAL membrane系统是DUAL systems BioTech公司开发的专门筛选跨膜蛋白间相互作用的检测技术，它利用分离的泛素系统 (split-ubiquitin)直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用，是目前市面上唯一检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂系统。此系统采用NMY51酵母菌株，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；此菌株Transformation marker为：trp1，leu2-3，报告基因为：HIS3，ADE2和 lacZ，第一步通过营养缺陷型报告基因 (HIS3，ADE2)进行选择性生长筛选，进一步通过 LacZ报告基因进行β-半乳糖分析显色的定量或半定量筛选，三个独立的报告基因，受不同启动子的调控，降低假阳性几率。原理：泛素 (ubiquitin)分子量很小，由 76 aa残基组成；泛素作为降解信号分子，可以连接另外一种蛋白质的 N端，然后被泛素专一性蛋白酶 (UBPs)识别，从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。泛素可以人为分成两部分：N端 (Nub)，C端 (Cub)。首先，人为地将泛素 Nub的 3位异亮氨酸突变为甘氨酸 (NubI 突变为 NubG)。这样与 Cub的亲合力大大降低，避免了 Cub和 Nub自我结合或接近的可能性。其次，将Cub部分与人工合成的 LexA-VP16转录激活因子融合成一个融合蛋白Cub-LexA-VP16。正常条件下 NubG不与Cub 结合，UBPs也不能识别分离的泛素，转录激活因子也不会被切下来。最后，将要检测的蛋白质分别与NubG和Cub融合，形成 bait融合蛋 (bait-cub-LexA-VP16)和 prey融合蛋白 (prey-NubG)。如果 bait和 prey发生相互作用，就会促使 NubG和 Cub的相互接近，被 UBPs识别，导致 LexA-VP16的解离，进入核内，从而激活报告基因的转录。 此系统可使用四种Bait质粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，筛选标志均为LEU；三种Prey质粒：pPR3-C ，pPR3-SUC，pPR3-STE，筛选标志均为TRP。NMY51感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取100 µl冰上融化的NMY51感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA (95-100度5min,快速冰浴，重复一次）10 µl，PEG/LiAc 500µl并吸打几次混匀，30度水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3. 5000 rpm离心 40s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
4. ddH2O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4. NMY51酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90 h培养可见直径1 mm克隆。
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文献和实验CD51 分子 CD51 常用单克隆抗体或代号： 13C2,23C6,NK1- M7;(VNRa 链,integrin a V) 主要表达细胞： Pt,En,Meg [Pt] 分子质量(kDa)和结构： gp150,与CD61组成二聚体 功 能： 粘附VN、FN和vWF CD51 Aka vitronectin receptor-alpha chain; beta chain
Biochemical Studies on Human Rad51-Mediated Homologous Recombination
Rad51-mediated pairing between homologous DNA sequences during homologous recombination (HR) plays pivotal roles in DNA double-strand break repair. The multi-step process occurs through cooperation of Rad51 and a number of accessory protein
一、用 51 Cr 铬酸钠标记靶细胞 短期标记法 1 ．用 RPMI-1640 培养液洗涤 107 靶细胞，去上清液。用 0.5ml 不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入 100 μ Ci （ 3.7MBq ） 51 Cr 铬酸钠， 37 ℃水浴中标记 1 小时，每 5 ～ 10 分钟摇晃一次，混匀细胞。 2 ．如上用 RPMI-1640 培养液洗涤
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