- ¥998 - 3650
- 康朗生物
- CAT#: KL11007
- 中国/上海
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Chemically Competent Cell 产品说明书产品规格 （CAT#: KL11007）
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
基因型
F–ompT hsdS(rB–mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]
产品说明
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子 (AGA, AUA, CCC, CUA)对应的tRNA (argU, ileY, proL, leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列、pGEX、pMAL等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，氯霉素，链霉素，壮观霉素抗性。BL21- CodonPlus(DE3)-RIPL 感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/µg DNA。
操作方法
1. BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
Sample Induction Protocol (for reference only)
1.Inoculate a single colony from a freshly streaked plate into 5 ml of LB medium containing the appropriate antibiotic for the plasmid and host strain.
2.Incubate with shaking at 200 rpm at 37℃ overnight.
3.Inoculate 50 ml of LB medium containing the appropriate antibiotic with 0.5 ml of the overnight culture prepared in step 2(use the 500 ml triangular flask as the container would be better).
4.Incubate with shaking at 150 rpm at 37℃ until the OD 600 reaches 0.5-0.8.
5.(Optional)Pipet 1ml of the cultures into clean microcentrifuge tubes and place the tubes on ice until needed for gel analysis or storage at -20℃. These will serve as the non-induced control samples.
6.Add IPTG to a final concentration of 1 mM. Optimal time for induction of the target protein may vary from 2-16 hours, depending on the protein.
7.Incubate with shaking at 120 rpm at 37℃ for 3-4 hours. To determine the optimal time for induction of the target protein, it is recommended that a time course experiment be performed varying the induction from 2-16 hours.
8.Place the culture on ice for 10 minutes. Harvest cells by centrifugation at 5,000×g for 10 minutes at 4℃.
9.Remove the supernatant and store the cell pellet at -20℃ (storage at lower temperatures is also acceptable).
IPTG
Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
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文献和实验(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3
(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3
【交流】转载：JM109，DH5a，BL21这些感受态有何区别
1：DH5a菌株 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。 基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动
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