- ¥998 - 3650
- 康朗生物
- CAT#: KL10600
- 中国/上海
- 2025年07月14日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
ER2566 Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
ER2566
ER2566 Chemically Competent Cell 产品说明书产品规格 （CAT#: KL10600）
ER2566： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
基因型
F- λ- fhuA2 [lon] ompT lacZ::T7 gene1 gal sulA11 Δ(mcrC-mrr)114::IS10 R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]
产品说明
ER2566菌株是NEB公司开发的具有超高转化效率的蛋白表达原核菌株，来源于BL21。Lac启动子启动下游T7RNA聚合酶的表达，可用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达。fhuA2赋予ER2566菌株对噬菌体T1的抗性。同时ER2566为lon和 ompT蛋白酶缺陷菌株。Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺失能够有效抑制表达的异源蛋白在大肠杆菌体内的降解，Δ(mcrC-mrr)114，mcr-73突变的存在使ER2566菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的转化效率。ER2566感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达109 cfu/μg DNA。
操作方法
1.ER2566感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
Sample Induction Protocol (for reference only)
1.Inoculate a single colony from a freshly streaked plate into 5 ml of LB medium containing the appropriate antibiotic for the plasmid and host strain.
2.Incubate with shaking at 200 rpm at 37℃ overnight.
3.Inoculate 50 ml of LB medium containing the appropriate antibiotic with 0.5 ml of the overnight culture prepared in step 2(use the 500 ml triangular flask as the container would be better).
4.Incubate with shaking at 150 rpm at 37℃ until the OD 600 reaches 0.5-0.8.
5.(Optional)Pipet 1ml of the cultures into clean microcentrifuge tubes and place the tubes on ice until needed for gel analysis or storage at -20℃. These will serve as the non-induced control samples.
6.Add IPTG to a final concentration of 1 mM. Optimal time for induction of the target protein may vary from 2-16 hours, depending on the protein.
7.Incubate with shaking at 120 rpm at 37℃ for 3-4 hours. To determine the optimal time for induction of the target protein, it is recommended that a time course experiment be performed varying the induction from 2-16 hours.
8.Place the culture on ice for 10 minutes. Harvest cells by centrifugation at 5,000×g for 10 min at 4℃.
9.Remove the supernatant and store the cell pellet at -20℃ (storage at lower temperatures is also acceptable).
IPTG
Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验亦称橙果。为肉果的一种。是由多心皮合成的子房发育而成的果实。桔子、柚子（ Citrus sinensis）等都属于这类果实。外果皮一般强韧，含多量胡萝卜素和油质。中果皮厚而软，具有海绵状的结构。内果皮为囊状，是薄而结实的膜状物，囊中有许多毛发育，其中充满着细胞液，柑桔类（ Citrus）其可食的部分就是这部分。
真核细胞内具有界膜的细胞器。与高尔基体、溶酶体、过氧化物酶体及细胞核膜等一起，统称为内膜系统。内质网由单位膜围成的形状大小不同的小管、小囊或扁囊构成。是一个连续的网状膜系统，其内腔通连，内质网膜和核外膜相连，内质网腔与核膜间腔也通连。内质网的形态变化很大，随细胞种类、生理条件而异。如鼠肝细胞和一些分泌细胞的内质网有很多平行排列的扁囊；精巢间质细胞内质网为大量小管分支形成网状。在胚胎或未分化的细胞，内质网不发达，较小，随着细胞分化过程之进展，内质网大小和形态复杂性也增加
内质网(endoplasmic reticulum, ER)
用激素等, 均可使肝细胞的ER囊泡化。 根据内质网上是否附有核糖体,将内质网分为两类:粗面内质网(rough endoplasmic reticulum, RER)和光面内质网(smooth endoplasmic reticulum, SER)。由于内质网是一种封闭的囊状、泡状和管状结构，它就有两个面，内质网的外表面称为胞质溶胶面(cytosolic space), 内表面称为潴泡面(cisternal space)。 光面内质网和粗面内质网在细胞中的分布是不同的, 有的细胞
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
