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- 百奥莱博
- BTN51101-ZBA
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
243
- 英文名：
Tranzol
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
20次
特别提示：包括常态大肠杆菌细胞转化液(免感受态细胞制备)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：常态大肠杆菌细胞转化液(免感受态细胞制备)
英文名称：Tranzol
产品货号：BTN51101
产品规格：20次
本品能使各种常态的E.coli细胞直接用于快速转化实验，使广大用户不再因为简单的转化实验而再为感受态细胞的制备，保存和运输等繁琐的事情而操心，大大地缩短了基因克隆实验的时间，提高使用者的工作效率。
产品特点：
1. 不需专门制备感受态细胞,直接使用常态的细胞进行质粒转化,随用随配,十分方便。
2. 常态细胞包括新鲜培养的菌液,新鲜的或4℃放置数月的培养基菌落,甘油菌种保存液等。
3.适用菌种和质粒广泛,用过的E.coli菌种包括K12 系的DH5a和Tg1，B 系的BL21(DE3)。用过的质粒有pGEM，pET和Clion系列等。
4.转化效率适中，使用10ng质粒转化一般能得到上万个转化子)效率在10E5 到10E6 CFU/ug质粒之间),使用3-5μL连接液转化一般能得几千个转化子,足够筛选重组子使用(但不适合构建文库)。
5. 单管快速操作，整个操作可以在一个1.5mL塑料离心管中进行，zuì短可以在三十分钟内完成，不需要过夜细菌培养,热休克处理甚至恒温摇床,极其适用于自动化的大规模克隆筛选工作。
6. 稳定性好，本可以在-20℃条件下长期保存而不用担心转化效率的降低,而感受态细胞在同样条件下会迅速失去活性。
| 成分 | 规格 |
| 常态转化液 | 1ml |
| 阳性对照(pGEM3或pUC19)10μL,1ng/μL | 5T |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
1. 标记无菌的1.5mL塑料离心管并加入1mL液体培养基(如SOC或LB)，每次转化试验zuì好加上阳性对照(用提供的pGEM3或其他质粒)和阴性对照(不加DNA)各一个。
2. 如果使用E.coli菌落,则直接用接种环,无菌牙签或无菌吸头从培养皿上挑取1-5个菌落(直径在3-5 mm之间)到每个离心管中，用移液枪轻柔吹打散开。如果使用甘油菌种保存液,则直接取50-100μl菌种液到1mL培养液中。如果使用单个菌落培养得到的新鲜培养液，则取1mL培养了3-4小时的菌液直接从第4步开始。
3. 37℃保温1小时(如果保温时间延长到3-4小时，可以提高转化效率一倍，但过长则转化效率又开始降低)。
4.室温10000rpm离心1分钟后小心移弃上清(液体培养基)，离心速度低于10000rpm则细菌沉淀易丢失。沉淀的细菌约芝麻或麦片大小为宜。细胞过多或过少都不好。
5. 短暂离心，用移液枪小心将残留的培养液(约50μl)吸出，否则残留培养基将会严重影响转化效率，故此步不能省略。
6. 加入50μl 冰浴的Clion转化液并小心将细胞吹打均匀。
7. 加DNA样品。在样品管中加入1-5μl连接反应液并轻柔吹打均匀；在阳性对照管中加入5 ng阳性质粒(没被酶切的载体，也可以使用常用的pGEM，pUC，pBR322等质粒)；在阴性对照管中加入连接反应的阴性对照，如果没有则不加入任何溶液或加入1-5μl无菌水。
8. 将上述离心管置于-20℃直到液体凝固为止(一般需要20分钟到1小时)，然后冰浴放置5-10分钟。
9.在每个离心管中加入1mL无抗菌素的SOC或LB培养液，混匀后置37℃水浴保温1小时以便让抗性基因表达,否则将没有转化子生长。
10. 将溶液充分吹打混匀后分别取30-200μl分别涂于含相关的抗菌素的培养盘上，剩余溶液zuì好留4℃待用。
11. 37℃ 16-24小时培养，阴性对照盘上不应有任何落菌，否则可以判断操作中有污染或培养基中抗菌素浓度不够。使用质粒转化的阳性对照100μl涂盘一般能有上千个菌落。连接样品转化所得菌落数将取决于连接反应效率等多种因素，100μl的涂盘一般有几十到几百个转化子。
使用效果：
左图是用10 ngClionG载体转化10个E.coli Tg1菌落后得到的转化子。右图是用3μL连接液(ClionB载体+1 Kb DNA片段,10μL反应体系)转化10个E.coli DE3菌落后37℃过夜保温得到的转化子。涂盘量均为200μL。
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文献和实验,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。 转化率 统计每个培养皿中的菌落数。 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下： 转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积 转化频率（转化子数／每mg质粒DNA）＝转化子总数／质粒DNA加入量(mg) 感受态细胞总数＝对照组2菌落数×稀释倍数×菌液总体积／涂板菌液体积 感受态细胞转化效率＝转化子总数／感受
4℃下3000g冷冻离心5分钟； 6．弃去上清，加入 100μl预冷0.1M CaCl2 溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，在冰放置20分钟； 7．4℃下3000g冷冻离心5分钟； 8．弃去上清，加入 100μl预冷0.1M CaCl2 溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮； 9．细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂（ 15% - 20%甘油）后超低温冷冻贮存备用（－70℃）。 二、电转化法制备大肠杆菌感受态细胞的实验
方法一： 效率非常高，一般可到10*8，好时可到10*9，特别适宜于大片段与文库构建及珍贵材料的连接转化。 实验试剂： A液：1M，MnCl2： B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。 取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混匀
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