pBalbSumo质粒

特别提示：包括pBalbSumo质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：pBalbSumo质粒
产品货号：JN0111
产品规格：20次(1μg)

  pBalbSumo专为目标蛋白在大肠杆菌中可溶性表达设计，是预先用Xho I线性化的载体，可配合BalbRec PCR产物一步无缝克隆试剂盒（CatNo. JN0001）使用。
  外源蛋白在大肠杆菌中表达容易形成包涵体，使获得有生物学活性的蛋白增加困难。常见表达载体往往由于蛋白表达过快，目标蛋白来不及正确折叠而形成包涵体。该质粒使用于阿拉伯糖诱导，有较强的剂量依赖性。合适的阿拉伯糖浓度能够在保障表达效率的同时获得高效的可溶蛋白。SUMO融合标签可有效促进目标蛋白的正确折叠，从而提高蛋白质的可溶性，同时SUMO Protease（CatNo. PJN0016）是一种结构特异性的蛋白酶，只切割有正确构象的融合蛋白，因而准确移除 融合标签。
  目的基因扩增按常规方法设计引物后，在5′端引物前添加以下序列：GAA CAG ATT GGA GGT ATG； 3′端引物前添加：CGC GGC CGC AAG CTT。
  注意：5′端引物从第一个氨基酸不是甲硫氨酸(ATG)时，可使用 GAA CAG ATT GGA GGT。不希望目标蛋白C端保留His Tag时，3′端引物 需要加入终止密码子。

产品组成：

组份	规格
pBalbAvi-C	1ug
BalbRec 重组酶	20μl
10×BalbRec 重组缓冲液	50μl
Control Insert（50 ng/μl）	10μl
附赠
2×pfu MasterMix (快速上样型)	1ml
2×Fast Taq MasterMix(快速上样型)	1ml
DNA Ladder 2000 Plus	100μl

图例一）pBalbSumo融合蛋白表达。诱导前后显示明显的目标蛋白质表达。





质量控制：pBalbSuno线性化载体经过严格的自连测试以及连接效率测试。

除了pBalbSumo质粒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：λDNA(不含N6-甲基腺嘌呤)
货号：BTN90407B
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

名称：DNA加A尾试剂盒
货号：ALH352
规格：50次
本试剂盒提供了加A尾需要的所有成分，可以在20分钟左右完成整个过程。由Pfu、Pwo、Vent或KOD等有3’→5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带A尾的平末端DNA片段，如该平末端DNA片段需要和T载体相连接，需要先利用Taq DNA polymerase在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接。

试剂盒组分：
Taq DNA polymerase——————————50μl
10×A-tailing buffer—————————50μl
dATP Mix———————————————50μl

操作步骤：
1. 平末端PCR 产物用PCR 清洁（无非特异扩增）或者胶回收纯化（有非特异扩增）。
2. 纯化好的平末端DNA 片段按以下反应体系加A尾:
平末端DNA 片段—————————7μl（不超过1μg）
dATP Mix————————————1μl
10×A-tailing buffer——————1μl
Taq DNA polymerase———————1μl
3. 轻轻混匀后72℃保温20-30 分钟。
4. 加A 尾的产物可以不需要再次清洁或者胶回收纯化，可直接用于连接反应。

储存条件：-20℃。

本制品别名：PCR产物平末端DNA片段加A试剂盒

名称：JM109感受态细胞
货号：QN2144
规格：10×100μl|20×100μl
本公司生产的JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

基因型：recA supE44 endA1 hsdR17 gyrA96relA1 thi Δ(lac-proAB) F’[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]
特 点：一种琥珀抑制型F’重组缺陷菌株。支持M13噬菌体载体的生长，对转染的DNA有修饰作用，但无限制作用。该菌株中的F’带有lacZΔM15，后者使得与在λZAP中编码的β-半乳糖苷酶氨基端进行α-互补，可用于蓝白斑筛选。

操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）
1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100μl左右转化产物涂板；反之，如果转化的DNA总量较少，可取200～300μl的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事项：
1、收到感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失将到zuì低。

储存条件：-70℃保存，必须加干冰运输。自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。