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- Invitrogen
- SuperScript IV 第一链合成系统
- 18091050
- 2025年09月01日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
SuperScript IV 第一链合成系统
- 供应商：
SuperScript IV 第一链合成系统
- 规格：
50T
SuperScript IV 第一链合成系统
适用于 RT-PCR 的 SuperScript™ IV 第一链合成系统经过优化，以从纯化 poly(A)+ 或总 RNA 中合成第一链 cDNA。
试剂盒包括 SuperScript™ IV 反转录酶 (RT)，这是一种专有 MMLV 突变体，可在 RT 反应中产生稳健可靠的 cDNA 合成。SuperScript™ IV 合成系统相比基于 SuperScript™ III 的系统在抑制剂耐受性、合成性和反应速度等方面得到了很大提高，同时保留了前代系统的所有优点，包括较高的热稳定性、高效全长 cDNA 合成以及较低的 RNase 活性。在多种样品中存在可导致其他当前可用 RT 效率低下的抑制剂的情况下，SuperScript™ IV 系统仍能提供可靠、一致和快速的 cDNA 合成。
SuperScript™ IV 第一链合成系统包含 RT 反应所需的所有组分，以及一种其它对照基因和相关引物，同时为您提供定制 RT 设置的灵活性，以满足您的应用需求。SuperScript™ IV 合成系统是实现 RT-PCR 应用高性能和灵活性的首 选。我们推荐将其用于所有 RT-PCR 应用，尤其是当重现性和可靠性成为主要考虑事项，以及 RNA 样品中的抑制剂可能干扰 cDNA 合成，进而导致基因表达研究出现偏倚时，我们推荐使用这款产品。
SuperScript™ IV 第一链合成系统的特性包括：
•显著提高了对各种可能干扰 cDNA 合成的抑制剂的耐受性
• 能在各类样品中进行可靠、特异的 cDNA 合成
• 反转录酶反应更快，将孵育时间从 >50 min 缩短至 10 min
• 持续合成能力明显优于 SuperScript™ III RT
酶来源
从表达 M-MLV pol 基因的大肠杆菌中提纯制成，并经过改良提高了热稳定性和半衰期、合成性、抑制剂耐受性，降低了 RNase H 活性。
性能和质量检测
脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶及核糖核酸酶分析；cDNA 产物的得率和长度。
单位定义
一个单位的 SuperScript™ IV RT 是指在 37°C 下使用多聚腺苷酸 (A) 寡核苷酸 (dT)12-18 作为模板/引物，将 1 nmole 脱氧核糖核酸在10分钟内掺入酸可沉淀材料所需要的酶量。
单位反应条件
50 mM Tris-HCl（pH 值 8.3）、4 mM MgCl2、10 mM DTT、50 mM KCl、0.5 mM dTTP、0.4 MBq/mL [3H]-dTTP、0.4 mM 多聚腺苷酸 (A) 寡核苷酸 (dT)12-18 和酶，20 μL，37°C 下 10分钟。
• Oligo(dT)20 ，50 μL (50 μM)
• 随机六聚体，250 μL (50 ng/μL)
• 5X RT 缓冲液，1 mL
• DTT，250 μL (0.1 M)
• dNTP 混合物，250 μL (10 mM)
• SuperScript IV RT，50 μL (200 U/μL)
• 核糖核酸酶抑制剂，100 μL (40 U/μL)
• 大肠杆菌 RNase H，50 μL (2 U/μL)
• DEPC 处理水，1.2 mL
• 总 HeLa RNA，20 μL (10 ng/μL)
• 正义链对照引物，25 μL (10 μM)
• 反义链对照引物，25 μL (10 μM)
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文献和实验Temperature Stable）试剂整合了您需要的一切，以方便的、一次使用的冻干分装形式提供高产量第一链cDNA合成。使用专利的冻干程序，在有冷冻保护剂存在的情况下，预混合、分装和冻干每个系统的组分。提供在室温下长达一年的稳定，同时确保酶活性的最大恢复。再次悬浮快速而简单：简单地加入引物和模板，再次悬浮反应混合物，短时vortex振荡混匀，就可以进行合成了。 SuperScript™ III RTS第一链cDNA合成系统 这个系统包含进行第一链cDNA合成所需
）和人DNA聚合酶εmRNA的全长cDNA的合成由SuperScriptⅡ和MMLV催化。利用oligo(dT)为引物，由5μg Hela细胞总RNA合成cDNA。样品使用RNaseH处理，然后使用ELONGASE? Enzyme Mix将1/10的cDNA合成反应产物扩增35个循环。 RNaseH产生的障碍 RNaseH对第一链cDNA的影响。RNaseH在cDNA合成期间降解RNA:DNA复合体中的RNA。红色箭头代表潜在的酶切位点。
为了研究 RNA 的功能，通常需要通过反转录过程将 RNA 转化为更稳定的互补 DNA（cDNA）。之后 cDNA 可通过分子克隆、PCR 和测序等技术做进一步的研究。因此，反转录过程是许多 RNA 实验研究流程的关键步骤。 为了获得更为准确的研究结果，本期总结了反转录过程中需要考虑的一些因素，以期能够抛砖引玉，给你的实验研究带来些许帮助。 本期内容 RNA 模板制备 基因组 DNA 的去除 反转录酶选择 引物选择 主要反应组分 反应温度和反应时间 第一链和第二链 cDNA 合成 注
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
