植物内质网膜蛋白提取试剂盒

特别提示：包括植物内质网膜蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：植物内质网膜蛋白提取试剂盒
英文名称：Plant endoplasmic reticulum Extraction Kit
产品货号：HR8044
产品规格：50T/100T

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。
植物内质网膜蛋白提取试剂盒用简便快速的方法可以从各种植物样本中提取内质网膜蛋白，提取过程简单方便，可在一小时内提取得到高质量的内质网膜蛋白。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将zuì后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。
本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，但是蛋白回收率和纯度相比酶法较低。酶法提取制备的蛋白纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒(相关产品HR8061)。

储存条件：蛋白提取液、溶解液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得zuì佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
1．使用方便。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
●离心机● 振荡器● Dounce匀浆器● 移液器●冰箱●冰盒
耗材
●离心管● 吸头
试剂
● PBS

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

1．取1g 新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
2．加入2ml 提取液A 后用匀浆机充分匀浆或者加适量提取液A 后用Dounce 匀浆器充分匀浆。
【注】：
●培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆即可，匀浆后加提取液混匀后直接进行后续离心。
● 没有Dounce 匀浆器也可置于研钵用液氮研磨，研磨后假如提取液A。
● 没有液氮研磨条件也可加入提取液A 后直接置冰上研磨。
3．将匀浆用100μm细胞筛过滤；
【注】：
● 没有细胞筛网的话可以将滤液静置片刻，让大的组织块自然沉降，收集细胞上清。
● 如果匀浆液较粘稠，不好吸取，可以将吸头尖剪掉一点。
4．将滤液置振荡器轻微振荡20-30分钟。
5．将滤液700g离心10分钟。取上清。
6．将上清20000g 力离心10分钟。弃沉淀，取上清。
7．将上清30000-50000g离心20分钟。
【注】：
● 如果条件允许，可将离心力加大到100000g，有利于回收光面内质网小泡。
8．弃上清，在沉淀中加入500μl提取液B和2μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后在4℃条件下振荡1小时。
9．在4℃，10000g条件下离心5分钟，取上清。
10．在37℃水浴10分钟。
11．在37℃ 800-1000g离心2分钟。
12．此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，大约50μl液体。
【注】：
● 下层为粘稠状液体。
13．用50-150μl膜蛋白溶解液溶解下层溶液，即得内质网膜蛋白。
14．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
膜蛋白丰度比较低，需要足够的植物样品上样量才能提高蛋白浓度。也可能第8步处理时，部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂B
的处理时间即可。zuì好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

除了植物内质网膜蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
BTN130525	蛋*磷酸酶抑制剂混合液Ⅱ	1mL
YT611	RIPA裂解液(弱)	100ml
YT612	RIPA裂解液(强中弱套装)	共150ml
WE0320	封闭用正常山羊血清工作液(免疫组化封闭液)	10ml
SNM403	30%*烯酰胺(29：1)	500ml|200ml
SNM405	1 M×Tris Buffer缓冲液(pH6.8)	500ml
SNM448	SDS-PAGE电泳缓冲液(10×)	500ml
SNM458	蛋白电泳预制胶(10%，10孔/15孔)	10块/盒
SNM502	浓缩型SABC-Cy3免疫荧光试剂盒(适用人/大鼠/小鼠/山羊/兔中一种)	400张片
RFT064	30％丙稀酰胺溶液(19:1)	100ml
RFT197	蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母蛋白提取用)	1ml|5×1ml
KFS073	1%封闭试剂(1×TBS)	500ml
SY0349	5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液	2ml
SY0365	20×Tris-Acetate-SDS电泳缓冲液	500ml
ZN2925	Western洗涤缓冲液(TBS-T)	500ml
QN1081	普通RIPA裂解液(组织/细胞)	100ml
QN1082	高效RIPA裂解液(组织/细胞)	20ml|100ml
QN1242	封闭用鸡血清(原液)	10ml
HR0368	5×SDS-PAGE上样缓冲液	5ml/10ml
HR8166	蛋白浓缩试剂盒	50T
HR8168	蛋白浓缩试剂盒	50T
MT0068	全能核酸降解酶	25KU|100KU|10000KU
GL2934	CLP蛋白酶抑制剂混合液(1mg/ml)	1ml