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多点突变试剂盒

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  • 百奥莱博
  • 北京
  • 2025年07月13日
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    • 英文名

      Multi Site-Directed Mutagenesis Kit

    • 保质期

      长期

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    • 规格

      10 rxn

    特别提示:包括多点突变试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!


    产品名称:多点突变试剂盒
    英文名称:Multi Site-Directed Mutagenesis Kit
    产品货号:SY0021
    产品规格:10 rxn

    使用本试剂盒,可一次性向目标质粒上三至五个不连续位点(相距超过50bp)同时引入定点突变。该试剂盒由两个模块组成:Pfu DNA Polymerase扩增模块和快速克隆模块。Pfu DNA Polymerase超高的保真度显著降低了扩增过程中引入新突变的可能性,其卓越的长片段扩增能力,广泛适用于长度小于20 kb的任何质粒扩增。快速克隆系统利用高效的同源重组反应替代传统的退火成环反应。因此使用本试剂盒进行DNA定点突变时,引物设计更加灵活,且扩增反应以指数方式进行,极大减少了模板使用量,有利于原始甲基化模板的彻底降解。

    本试剂盒中的重组酶Exnase MultiS经过优化,专门针对多碱基进行定点突变。此外,如扩增产物特异,其DpnI消化产物可不进行DNA纯化而直接用于重组反应。高度优化的反应缓冲液、快捷的操作流程以及极高的成功率,使得本产品成为DNA多点突变*选试剂盒。

    除了多点突变试剂盒,,我公司还供应以下相关产品:



    名称:即用型蓝白T载体E型(无RNA启动子,无MCS)
    货号:BTN120515
    规格:20次
    本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段,其两个末端的5′都有一个突出的T,可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

    产品特点:
    1. 由于是通过酶切制备,所以载体两端的带T率为100%,远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
    2. 克隆的阳性率一般在90%以上,缩短了筛选过程。
    3. 来源于pUC19 ,无RNA聚合酶启动子,插入位点两侧无多克隆位点。
    4.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
    5. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内,可以进行蓝白斑筛选。
    6.含有丝状噬菌体f1 复制起始子,可以制备单链DNA。

    产品组成:
    组分 规格
    即用型蓝白T载体E型(10ng/μL) 60μl
    阳性对照(35ng/μl) 30μl


    储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期两年。

    质粒图谱
    即用型蓝白T载体E型(无RNA启动子,无MCS)质粒图谱

    名称:JM110化学感受态细胞
    货号:RFT114
    规格:20×100μl
    本公司生产的JM1110感受态细胞采用经特殊工艺处理得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测,转化效率可达108cfu/μg,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

    基因型:rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]

    产品特点:
    1、JM 110 是一种甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株,使DNA 不被甲基化,使用其转化所得到的质粒DNA,可被对dam、dcm 甲基化敏感的限制酶切割。
    2、只适用于转化质粒DNA。
    3、细胞具有硫酸链霉素(Strr) 抗性。

    操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
    1、取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
    2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30分钟。
    3、将离心管置于42℃水浴中放置45秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3分钟,该过程不要摇动离心管。
    4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
    5、将离心管内容物混匀,吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12—16小时。

    注意:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200—300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

    注意事项:
    1. 感受态细胞应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免感受态细胞的转化效率。
    2. 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
    3. 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。

    储存条件:-70℃,有效期6个月。

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