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- 康朗生物
- KL-A257
- 国产/进口
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
86
- 英文名：
单增李斯特氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒
- 保质期：
-18℃以下，有效期6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-18℃以下，有效期6个月
- 规格：
48次/盒
单增李斯特氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 两管式 RT-PCR，一次 RT 反应产物可以作为多次 PCR 的模板。本试剂盒提供 10 次的 RT 反应试剂和 50 次的 PCR 试剂。
3. 引物经过优化，特异性高，引物是根据基因的保守区域设计，适用于所有强、中、弱新城疫毒株，产物长度为 421 bp。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
单增李斯特氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒特点优势：
1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
单增李斯特氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒性能指标：
1. 试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
规格及成分
| 成分 | 编号 | 50 次纸盒包装 |
| MMLV 逆转录酶 (含 RI) | 80206A | 20 μL |
| RT Buffer（含 dNTP） | 60906C | 60 uL |
| PCR Mix 3.0（含染料） | 90805 | 1.5 mL |
| ND 阳性对照 | 896897 | 50 μL |
| ND 专一性引物一（正向引物） | yw896 | 50 μL |
| ND 专一性引物二（反向引物） | yw897 | 50 μL |
| RNase-free 水 | 80403 | 1 mL |
| 使用手册 | 11-171201sc | 1 份 |
自备试剂：样品 RNA。
单增李斯特氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆转录）反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:
| RNA 模板 | 0.01pg-500 ng （如果丌知道浓度则用 1-10 μL） |
| ND 专一性引物二（反向引物） | 2 μL |
| RNase-free 水 | 补水到 12 μL |
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。
三、PCR（60 μL 体系）
1、在 PCR 管中加入下列成分：
| 成 份 | 样品 | ND 阳性对照 | 阴性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 30 μL | 30 μL | 30 μL |
| cDNA 样品（上步的 RT 反应液） | 1-5 uL | 无 | 无 |
| ND 阳性对照 | 无 | 2 μL | 无 |
| ND 专一性引物一（正向引物） | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| ND 专一性引物二（反向引物） | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| 补水到 | 60 uL | ||
| 过程 | 温度 | 时间 | 其他 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | |
| PCR 反应 （40个循环） |
95℃ | 30 s | |
| 50℃ | 30 s | ||
| 72℃ | 40 s | ||
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min | |
1、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。
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文献和实验基反应可生成红色化合物。 为了获得有效的实验数据，实验菌种选用CICC,21633单增李斯特氏菌（以下简称单增菌），质控菌种选用CICC,10041蜡样芽孢杆菌（以下简称蜡样菌），V-P培养基选用同一厂家、同一批次、且在有效期内的生化管。 蜡样菌V-P培养基培养24h，滴加甲、乙液后30min内呈现阳性，证明试验用V-P培养基无质量问题。单增菌V-P培养基分别于30℃和37℃培养24h、48h、72h、96h，实验结果如下表。通过实验我们发现两种现象。其一，单增菌培养的时间
。此外，QIAGEN还提供专门用于Rotor-Gene Q的 Rotor-Gene Multiplex PCR和RT-PCR Kit。所有这些试剂盒都是为基因表达分析设计的，能同时检测最多4个目标，用在两步法和一步法RT-qPCR中。这些试剂盒特别适合低丰度的转录本，能检测低至10个拷贝。 如何提高成功率 建立多重反应的步骤如下：1)优化引物和探针序列，2)选择标记探针的报告基因和淬灭基因，3)优化单重实验，4)验证多重实验，5)必要时，优化多重实验。在开始多重PCR前，需要记住几件
片段，用DNA回收试剂盒回收。 2．用E.Z.N.A.GelExtractionKit进行回收 a)用0.8%琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段，在紫外灯下切取目的片段，放入Eppendorf管。并称重。 b)每管加入等体积的Bindingsolution(约100μl/0.1g)，60℃水浴7min至凝胶完全融化，其间温和地混合几次。 c)在Hind®DNAspin中加入700μlDNA/琼脂糖混合液。室温下，10,000rpm，离心3min，去上清。若DNA/琼脂糖混合液体积大于700μl，每次取
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