- ￥380 - 3800
- 百奥莱博
- YT032-UFX
- 北京
- 2025年07月11日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 英文名：
Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1000cm2
本试剂盒可以用于检测至少10块10×10cm有生物素标记EMSA探针的膜，即共1000cm2。需要特别注意的是，本试剂盒并不适用于生物素标记蛋白的检测。
本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate，HRP和Streptavidin共价交联的比例大于3，这样比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate两种试剂进行检测要更方便，并且灵敏度更高。采用了非特异性结合比avidin更低的strepatavidin，使检测结果背景更低灵敏度更高。
本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂，生物素标记的DNA探针或EMSA探针的制备可以相应地使用我公司的生物素3"末端DNA标记试剂盒(YT030)或EMSA探针生物素标记试剂盒(YT189)。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| BalbECL UT A液 | 55mL |
| BalbECL UT B液 | 55mL |
| Streptavidin-HRP Conjugate | 100μL |
| 封闭液 | 380mL |
| 洗涤液(5X) | 250mL |
| 检测平衡液 | 250mL |
储存条件：-20℃
注意事项：
- 需自备带正电荷尼龙膜，以及凝胶电泳时所需的相关试剂。带正电荷尼龙膜。
- BalbECL UT A液和B液均对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
使用方法：
- 在使用Biotin标记探针的情况下，完成Southern、Northern杂交及后续洗涤后，或RPA的转膜和交联后，或EMSA的转膜和交联后，可以使用本试剂盒开始检测。下面的检测过程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜较大或较小，各溶液的用量可以按比例放大或缩小。
- 37～50℃水浴溶解封闭液和洗涤液。
注意：封闭液和洗涤液必须完全溶解后方可使用，封闭液和洗涤液可以在室温至50℃之间使用，但必须确保这两种溶液中均无沉淀产生，在冬天需特别注意。 - 取一合适的容器加入15mL封闭液，再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。
- 取7.5μL Streptavidin-HRP Conjugate加入到15mL封闭液中(1:2000稀释)，混匀备用。
- 去除封闭液，加入上一步中配制的15mL含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。
- 取25mL洗涤液(5X)，加入100mL重蒸水或Milli-Q级纯水，混匀配制成125mL洗涤液。
- 将尼龙膜转移至另一装有15～20mL洗涤液的容器内，漂洗1分钟。
- 去除洗涤液，加入15～20mL洗涤液，在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。
- 重复步骤8三次(共洗涤四次)，每次洗涤时间均约为5分钟。
- 将尼龙膜转移至另一装有20～25mL检测平衡液的容器内，在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。
- 取5mL BalbECL UT A液和5mL BalbECL UT B液混匀，配制成BalbECL UT工作液。
注意：
① BalbECL UT工作液必须现配现用。
② 从本步骤起操作方法和注意事项同Western实验的荧光检测。 - 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上，放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。
- 在尼龙膜的表面小心加上步骤11配制好的共10mL BalbECL UT工作液，使工作液完全覆盖尼龙膜。室温放置2～3分钟。
- 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。将尼龙膜放在两片保鲜膜或其它适当的透光薄膜中间，并固定于压片暗盒(也称片夹)内。
- 用X光片压片1～5分钟。可以先压片1分钟，立即显影定影，然后根据结果再调整压片时间；也可以直接分别压片30秒、1、3、5分钟或更长时间，然后一起显影定影观察结果。
常见问题：
- 背景较高。
- 可能是由于封闭液或洗涤液中出现沉淀或混浊。解决方法是参考使用说明，加热封闭液和洗涤液使封闭液和洗涤液完全溶解。
- 出现斑点状背景。
- 可能是由于过长时间存放导致Streptavidin-HRP Conjugate中出现沉淀，解决方法是12000～14000g离心1分钟再吸取近液面的Streptavidin-HRP Conjugate。转膜时有气泡也会导致斑点状背景产生，解决方法是转膜时胶、膜、滤纸之间确保没有气泡。
- 没有条带或信号很弱。
- 探针标记效率太低，解决方法是检测探针标记效率，确保探针的标记效率较高。
- 探针用量不足或样品量不足，解决方法是加大探针用量或加大样品用量。
- 样品中待检测的核酸降解，解决方法是检测待检测的核酸样品是否出现降解，如降解则须制备新的样品。
- 转膜效果不佳，解决方法是检查转膜的方法和步骤，最好使用预染的标准品作为转膜的对照。
- 选择了不适当的膜，尽管不少情况下硝酸纤维素膜也可以完成检测，请优先选择带正电荷的尼龙膜。
- 检测过程中膜干掉了，解决方法是确保检测过程中膜可以被液体覆盖或始终保持湿润。
- 没有交联或交联效果不佳，解决方法是进行适当的交联，如果交联效果不佳则须检测交联的效率。
- 洗涤液(5X)没有稀释就直接使用，请把洗涤液(5X)稀释至1X后再使用。
- X光片曝光时间不足，解决方法是适当延长曝光时间。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验生物素标记凝集素的组织化学染色程序生物素(biotin)与亲和素(avidin)具有非常高的亲和性。1分子亲和素可与4分子生物素结合。故可利用这一特点，先将生物素与辣根过氧化物酶(HRP)结合，再制备辣根过氧化物酶标记的亲和素―生物素复合物(avidin-biotin-peroxide complex，ABC)，该复合物可含数个辣根过氧化物酶分子。又因复合物中的亲和素未被饱和，除与辣根过氧化物酶―生物素结合外，尚有一定的位点可与其他生物素结合。因此，实验中可通过生化反应将凝集素结合在另外的生物素
，使核酸和蛋白质的生物素标记探针技术前进一大步。Renz 等（1984）、Thorpe 等（1985）和Pollars 、Knight等（1990）用化学法直接把辣根过氧化物酶接到DNA上，运用发光显影法提高了敏感性。Muh－legger等（1990）用地高辛（Digoxigenin）标记DNA，再用地高辛抗体连接碱性磷酸酶，催化发光底物金刚烷脱磷并发光，灵敏度与32 P标记探针相同，而且32 P、标记的DNA探针杂交膜需要在-70℃件下曝光4～7天于X光片上显影，碱性磷酸酶发光法只需10～30min
从化学和生物学的意义上理解，探针是一种已知特异性的分子，它带有合适的标记物供反应后检测。探针和靶的相互反应如抗原 - 抗体、血凝素 - 碳水化合物、亲合素 - 生物素、受体和配体，以及核酸与其互补核酸间的杂交等反应均属此类。用核酸探针与待检标本中核酸杂交，形成杂交体，再用呈色反应显示。此方法用于疾病的诊断，称为分子杂交基因诊断。此法开始用于遗传性疾病的诊断如血红蛋白病的诊断、先天性遗传病的产前诊断。近来，已发展为诊断外源性病原体如病毒、细菌、原虫等的方法；内源
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
