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- 百奥莱博
- YT469-DVT
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
121
- 英文名：
C-Flag plasmid（with CMV promoter）
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1μg
特别提示：包括C端Flag标签融合蛋白质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：C端Flag标签融合蛋白质粒
英文名称：C-Flag plasmid（with CMV promoter）
产品货号：C端Flag标签融合蛋白质粒
产品规格：1μg
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达C端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的3"端含有一个可以编码Flag标签的序列，因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| multiple cloning site | 680-740 |
| c-Flag tag | 741-764 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 817-838 |
| SV40 polyA signal | 850-1233 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 1371-1675 |
| bla promoter | 1700-1824 |
| SV40 promoter | 1844-2182 |
| neomycin/kanamycin resistance ORF | 2217-3008 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3009-3467 |
| pUC origin | 3596-4263 |
本质粒(5010bp)的图谱如下：
使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件：-20℃。
除了C端Flag标签融合蛋白质粒,，我公司还供应以下相关产品：
名称：DNA去磷酸化试剂盒
货号：BTN130828
规格：20次
分子克隆时，载体的自连极大降低了连接效率，而对载体DNA 两个5′端的-PO4基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNA或RNA5′端标记前，也需要将其本来的-PO4基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就是针对这一目的而开发。
产品特点：
1.基于细菌碱性磷酸酶，反应在较高温度进行，效率更高。
2. 把DNA和RNA 5′端的-PO4基团变成-OH基团，丧失连接能力。
3. 模板可以是单链，也可以是双链，既可以是DNA，也可以是RNA。
4.处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。
5. 本产品足够20次去磷酸化实验。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 10×去磷酸缓冲液 | 100μl |
| 细菌碱性磷酸酶(0.5U/μL) | 50μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。
使用方法：
注意：dNTP和ATP 也是碱性磷酸酶的底物，所以如果核酸溶液中有dNTP和ATP，一定要先将其去除。否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶，降低DNA 去磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(50μL)：
| 成分 | 用量 |
| DNA片段 | 不超过10pmol |
| 10×去磷酸缓冲液 | 5μl |
| 细菌碱性磷酸酶 | 2.5μl |
| 超纯水到 | 50μl |
2、65℃反应30分钟。如果是RNA样品，建议在37℃反应30分钟。
3、酚氯*抽提去除酶活性，乙醇沉淀DNA 待用(见附)。
附：酚/氯*抽提DNA、乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，下列操作仅供参考)：
1、在50μl DNA溶液中加入50μl超纯水增加体积，以免纯化过程中DNA 丢失。如果有必须，可以加入和4μL 核酸助沉剂提高回收效率。
2、加入100μL 酚/氯*/异戊*25：24：1 混合液震荡半分钟混匀，室温12000g离心3分钟，转移上清到新离心管中。
3、重复上步操作一次。
4、加0.1倍体积(即10μL)的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
5、再加入2.5倍体积(即250μL)的无水乙醇。
6、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
7、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
8、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
9、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。
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文献和实验被遮蔽，从而干扰相互作用。因此，通常构建质粒的时候是N端、C端tagged同时分别构建，以备万一。 内源性蛋白的相互作用，主要依靠抗体IP，WB或者质谱分析。另外一条途径，是用外源性蛋白的coIP指代内源性蛋白，上文提到的tandem-tag技术的目的就是为了实现这种可能。它的核心是将外源性蛋白的过表达降低极低水平用于模拟体内环境。 实际上，在构建外源过表达体系的时候，通常可以得到一系列表达水平差异的稳定单克隆，可以通过进一步筛选获得外源与内源相加与原内源蛋白水平相当的细胞株（在细胞调控承受的范围
也可以，这样用一个启动子CMV同时表达两个蛋白，而不是融合蛋白。 liuyicheng84427 VEGF应该加在GFP的N端还是C端？ lmnsmu VEGF加在GFP的N端或C端均可以，而且有一些载体如pEGFP-N1或pEGFP-C1在N端或C端已经有GFP的序列，只需将你的目的基因序列插入到MCS区即可融合表达。 naj2007 多谢大家！ hiqihong
的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点，FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。 由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，这一系统已用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody （货号#E022060 ）可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag
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