Fluo-3,AM 121714-22-5

Fluo-3, AM（全称：Fluo-3, acetoxymethyl ester）是一种在细胞生物学和药理学中极为常用的细胞渗透性钙离子荧光探针。它是经典钙指示剂 Fluo-3 的 AM 酯化衍生物，专门设计用于活细胞内游离钙离子（Ca²⁺）浓度的实时、动态监测。

• 中文名称：Fluo-3 AM / 钙离子荧光探针 Fluo-3 AM
• 英文名称：Fluo-3, AM / Fluo-3 acetoxymethyl ester
• CAS 号：121714-22-5
• 分子式与分子量：C₅₁H₅₀Cl₂N₂O₂₃，1129.85 g/mol
• 外观性状：通常为红色或暗红色固体粉末。
• 溶解性：极易溶于 DMSO（通常配制成 1-5 mM 的储备液），不溶于水。
• 储存条件：对水分、光和热敏感。需严格密封、避光，储存在 -20 °C 的低温环境中（可稳定保存 6-12 个月）。在 4 °C 或冰浴下可能会凝固粘附在管壁上，使用前需在室温（20-25 °C）水浴中温育至完全融解。

光谱与荧光特性

• 激发与发射波长：其钙离子结合态的最大激发波长（Ex）为 506 nm，最大发射波长（Em）为 526 nm，呈现明亮的绿色荧光。在实际操作中，通常使用 488 nm 的氩离子激光器进行激发，并在 525-530 nm 处收集发射信号。
• 荧光增强机制：Fluo-3 AM 本身几乎是非荧光的。它进入细胞后，被胞内酯酶水解掉 AM 基团，转化为 Fluo-3。当 Fluo-3 与钙离子结合时，其荧光强度会发生剧增（通常增强 100 倍以上），但激发和发射峰的位置基本不发生偏移。
• 钙离子亲和力：在缓冲液中与 Ca²⁺ 结合的解离常数（Kd）约为 335 nM - 390 nM。相较于 Fura-2，Fluo-3 与钙离子的结合能力较弱，这使得它更适合检测细胞内较高浓度的钙离子水平，且对钙离子的即时变化反应更准确，不易因解离速度慢而导致荧光信号滞后。
• 特异性：对钙离子响应灵敏，且对镁离子（Mg²⁺）不敏感。但需注意，基于 BAPTA 骨架的探针可能会结合重金属阳离子（如 Mn²⁺、Zn²⁺），必要时可使用 TPEN 进行控制。

主要应用

• 活细胞钙成像（Calcium Imaging）：广泛用于荧光显微镜、激光共聚焦显微镜，实时监测细胞内钙离子的空间动力学变化（如钙火花、钙波）。
• 流式细胞术（Flow Cytometry）：通过流式细胞仪（FL1通道）快速定量分析大量细胞样本中的钙通量（Calcium flux），常用于评估免疫细胞激活状态。
• 高通量药物筛选（HTS）：适用于微孔板读数仪，用于筛选作用于 G 蛋白偶联受体（GPCR）、离子通道或细胞内信号通路的激动剂或拮抗剂药物。
• 亚细胞器钙离子检测：也被证明可用于评估线粒体等细胞器中钙离子的浓度和动力学变化。