Fluo-3,AM

Fluo-3, AM（CAS号：121714-22-5），在生物学和化学领域通常被称为 Fluo-3 AM 或 钙离子荧光探针 Fluo-3 AM。它是 Fluo-3 的细胞膜通透性前体（AM酯），是目前科研中最常用的可见光激发型细胞内钙离子指示剂之一，专门用于检测活细胞内游离钙离子（Ca²⁺）浓度的动态变化。

• 中文名称：Fluo-3 AM / 钙离子荧光探针 Fluo-3 AM
• 英文名称：Fluo-3, AM / Fluo 3-AM
• CAS号：121714-22-5
• 分子式：C₅₁H₅₀Cl₂N₂O₂₃
• 分子量：1129.85
• 外观性状：暗红色固体或结晶粉末

物理与化学性质

• 光谱特性：在细胞内水解为 Fluo-3 并结合钙离子后，其最大激发波长（Ex）为 506 nm，最大发射波长（Em）为 525~526 nm（呈现绿色荧光）。
• 钙离子亲和力：对 Ca²⁺ 的解离常数（Kd）约为 390 nM，在饱和 Ca²⁺ 条件下的荧光量子产率约为 0.14。
• 发光机制：Fluo-3 AM 本身几乎不发荧光；由于带有乙酰氧基甲酯（AM）基团，它具有细胞膜通透性。进入细胞后，被细胞内的酯酶水解，释放出不透膜的 Fluo-3。Fluo-3 只有在与细胞内游离的 Ca²⁺ 结合后，才会发出强烈的绿色荧光。
• 溶解度与储存：易溶于二甲基亚砜（DMSO）。粉末状态建议在 -20°C 下密封、避光保存；若溶于 DMSO 中，建议在 -80°C 下避光保存。

作用机制与应用领域

• 流式细胞术与荧光分析：在流式细胞仪中，可通过 FL1（绿色通道）传感器高通量监测细胞内钙离子的变化，常用于功能性 GPCR 筛选等基于细胞的高通量分析。
• 细胞内钙动态监测：广泛应用于荧光显微镜、荧光光谱仪及微孔板读数仪中，研究激素、神经递质或电信号刺激引起的细胞内钙瞬变。
• 细胞成像与凋亡探针：结合共聚焦激光扫描显微镜，Fluo-3 AM 的高对比度使其成为细胞内钙释放事件（如钙火花）成像的极好工具，同时也可作为细胞凋亡探针使用。

用途限制：仅供科学研究使用（Research Use Only），不可用于人类或动物的临床诊断、治疗或体内（in vivo）实验。

操作注意：操作时应佩戴防护手套和护目镜，避免直接接触皮肤和眼睛。