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- 2025年07月11日
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- 文献和实验
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46
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30 次
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海抚生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
30 次
1. 组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
高 pH 缓冲液套装30 次保存详细介绍：
高 pH 缓冲液套装30 次保存实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
高 pH 缓冲液套装30 次保存操作流程：
1. 根据要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍（如100mg组织约用1ml RNAwait）；离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中；
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状，立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织（如大鼠的肾脏、脾脏，小鼠的大部分器官）取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜（4℃过夜是必需的，这样可使RNAwait完全渗入到组织中），然后转移到-20℃冰箱（RNAwait在-20℃时仍为液态，有结晶析出，是正常情况）；或者在4℃冰箱过夜后，从RNAwait中取出组织块，转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本，反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
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文献和实验）。 4. 保存几个月 可以将其保存在-20°C，并加入 50% 甘油避免冻住。 5. 保存几个月至几年 此时应把样品在-70°C 或液氮中冷冻。在这种温度下，加甘油就没那么有必要了，但加 5 - 50% 的甘油可以帮助保持蛋白质的稳定性。 6. 其他储存方法： 4°C，在硫酸铵沉淀中保存。 冻干的形式保存：在 4°C 或更低温度下。要冻干保存的话，须将蛋白质溶在挥发性缓冲液（例如三甲胺/ HCl；pH 范围 6.8 - 8.8）中。而且需要注意，并非所有蛋白质在冻干过程中都是稳定的。
在碱性条件易降解，所以底物尽量要现用现配。 分析不同 pH 环境对 RPT 活性的影响，如图 2b 所示，rPT 在 pH 3.0 NaAc-HAc 缓冲液里最为稳定。随着 pH 的升高，RPT 酶活的损失程度也随之提高。在测定 rPT 最适 pH 值时发现，pH≤5 底物条件下，RPT 蛋白几乎无活性，如图 2a 所示。在 pH≤5 的缓冲液中，2 小时后依然保持较高的活性。说明在 pH≤5，RPT 稳定，自降解的速率大大降低，酶分子处于相对稳定的状态。此时把酶液转入到 pH 7.6 的测活
20°C下配制的缓冲液，在较高或较低的温度下PH值会改变吗？
对于普通使用的缓冲液，PH值随温度变化而变化。 下表列出温度改变10℃时，PH值的变化情况： 例如 20℃下配制PH7.4 Tris缓冲液,40℃时PH值为 7.4-(2x0.310)＝6.78 缓冲系统 pKa/20℃ [ Delta]pKa/10℃ Mes 6.15 -0.110 Ada 6.60 -0.110 Pipes 6.80 -0.085 Aces 6.90 -0.200 Bes 7.15 -0.160 Mops 7.20 -0.013 Tes
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