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Alkaline Phosphatase Assay Kit
产品关键词:
Phosphatase, Alkaline碱性磷酸酶;ALP/AKP;对Nitrophenol磷酸盐(pNPP);偶氮偶联法;显色法(定量);染色法(定性);
► 碱性磷酸酶(Phosphatase, Alkaline,ALP/AP/AKP/ALKP/ALPase,EC 3.1.3.1),是一种含两个相同亚基的二聚体,也是一种约含12%碳水化合物(6%己糖和6%其他中性糖)的糖蛋白,每个ALP分子含4个锌离子和4个二硫键。常见的碱性磷酸酶ALP包括肠道碱性磷酸酶(如小牛肠来源,calf intestinal)、胎盘碱性磷酸酶、非组织特异性碱性磷酸酶等。
碱性磷酸酶(ALP)活性的变化与一系列生理和病理事件紧密关联,比如骨骼发育、骨骼相关疾病、妊娠相关疾病和炎症性肠病等。正因如此,ALP被用作衡量生理特征或疾病的参照指标。另外,ALP活性检测在环境监测、食品质量控制等方面也呈现重要作用。
- 干细胞如诱导多潜能干细胞iPS,ALP活性很高,则ALP常被用作iPS诱导成功的标志;
- 分化的结肠癌细胞内ALP活性显著提高,则ALP常被当做结肠癌细胞分化程度的指标(定性/定量);
- 血清中ALP水平提高,被称作高碱性磷酸酶血症,此症状被认为和恶性胆管阻塞、原发性胆管硬化、原发性硬化胆管炎、肝淋巴瘤和肝肉瘤等肝胆疾病密切相关;
- ALP是成骨细胞的副产物,血清中ALP活性升高和骨头发育密切关联;
- 血清ALP活性过低也与一些疾病相关;
- 儿童和孕妇血清内ALP活性较常人高一些;血清中ALP活性范围在20-140U/L。
对Nitrophenol磷酸盐(pNPP)是一种常用的碱性磷酸酶(ALP)显色底物,碱性条件下能被ALP催化生成对硝基酚(para-nitrophenol,p-nitrophenol),呈黄色产物,可在400-415nm检测到吸光度。产物黄色越深,代表ALP活性越高,反之则酶活性越低。则通过比色分析可定量检测ALP水平。
反应式如下:
检测对象:
细胞或组织裂解液或匀浆液、血清、血浆、尿液等样品内源性碱性磷酸酶活性。
| 品牌 | 名称 | 货号 | 规格 | 目录价(元) |
| Anaspec | SensoLyte®pNPP碱性磷酸酶检测试剂盒*比色法* | AS-72146 | 500T | 2250 |
| sigma | p-NPP 对Nitrobenzene磷酸二钠盐 | N3129-5g | 5g | 980 |
| sigma | p-NPP 对Nitrobenzene磷酸二钠盐 | N3129-25g | 25g | 3767 |
| VWR 分装 | p-NPP 对Nitrobenzene磷酸二钠盐 | 0364-1g | 1g | 69元 |
| VWR 分装 | p-NPP 对Nitrobenzene磷酸二钠盐 | 0364-5g | 5g | 290元 |
| sigma | Triton-X-100 | V900502 | 500ML | 113元 |
试剂盒组分:
| 组份 | 描述 | 数量 |
| Component A | pNPP, colorimetric alkaline phosphatase substrate | 25ml |
| Component B | 10X Assay buffer | 50 mL |
| Component C | Stop solution | 25 mL |
| Component D | Triton-X-100 | 500 uL |
| Component E | Alkaline Phosphatase Standard, Calf Intestine | 10 ug/mL, 50 uL |
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文献和实验【求助】如何提取细胞中的cAMP?和普通蛋白的裂解buffer一样么?
磷酸二酯酶抑制剂。 贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解Buffer,有时要加磷酸二酯酶抑制剂。 关于是否需要乙酰化的问题,不同的试剂盒有不同的要求,主要取决于抗体是否灵敏,也取决于最后检测的方法。一般乙酰化之后可以提高10倍的检测灵敏度。如果抗体灵敏,可以免去乙酰化的那一步,太容易引入误差。 另外,如果用荧光法、发光法检测碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶的话,也没必要进行乙酰化,因为荧光法、发光法检测比显色法检测灵敏度高。 另外,Promega公司有基于培养细胞的cAMP检测试剂盒
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;在细胞发生凋亡阶段,Caspase被激活,活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后,黄色
检测的灵敏度主要依赖于对不同抗DIG 抗体共轭物显示方法的选择。以连接有碱性磷酸酶的抗DIG 抗体为例:即可以使用NBT 或BCIP 做底物的显色法,也可以使用HNPP 荧光碱性磷酸酶底物,检测的灵敏度常规可达到0.1pg (Souther blot) 。
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