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- 百奥莱博
- YT479-KEY
- 北京
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
140
- 英文名：
N-Flag plasmid（with CMV promoter）
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1μg
特别提示：包括N端Flag标签融合蛋白质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：N端Flag标签融合蛋白质粒
英文名称：N-Flag plasmid（with CMV promoter）
产品货号：YT479
产品规格：1μg
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5"端含有一个可以编码Flag标签的序列，因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| Flag tag | 679-702 |
| multiple cloning site | 705-778 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 821-842 |
| SV40 polyA signal | 854-1237 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 1375-1681 |
| bla promoter | 1706-1830 |
| SV40 promoter | 1850-2188 |
| neomycin/kanamycin resistance ORF | 2223-3014 |
| HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal | 3015-3473 |
| pUC origin | 3602-4269 |
本质粒的图谱如下：
使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件：-20℃。
除了N端Flag标签融合蛋白质粒,，我公司还供应以下相关产品：
| 货号 | 名称 | 规格 |
| BTN130804 | 单细胞裂解液(RNA提取) | 1mL |
| BTN90801A | 一站式TA克隆试剂盒 | 20次 |
| BTN60302 | 硫酸卡那霉素干粉 | 1g |
| BTN60210 | 硫酸链霉素溶液 | 10mL |
| BTN120684 | 噻孢霉素溶液 | 1mL |
| YT022 | 感受态细胞快速制备试剂盒 | 200次 |
| YT464 | C端CFP标签融合蛋白质粒(青色荧光蛋白) | 1μg |
| YT472 | C端Myc标签融合蛋白质粒 | 1μg |
| WE0255 | DNATrans转染试剂 | 500μl |
| ALH337 | 通用载体连接试剂盒 | 20次 |
| RFT118 | λ噬菌体DNA | 100μg |
| SY0011 | TOP10化学感受态细胞 | 100μl×10管 |
| SY0021 | 多点突变试剂盒 | 10 rxn |
| SY0022 | pUM19-T Vector TA克隆载体 | 5μg |
| SY0277 | X-α-Gal | 25mg |
| SY0284 | 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点) | 20T |
| SY0286 | 多片段一步法快速克隆试剂盒 | 10T |
| JN0001 | 一步定向无缝克隆试剂盒 | 20次|100次 |
| JN0113 | 单细胞全基因组PCR扩增试剂盒 | 10次 |
| QN1051 | 氯霉素试剂 | 10g |
| QN1058 | 20×SSC缓冲液，PH7.0 | 100mL|500mL |
| QN1061 | pEGFP-N2 荧光表达载体 | 20μl |
| MQ0002 | TOP10化学感受态细胞 | 20×100μl/100×100μl |
| MQ0014 | TG1化学感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
| MQ0016 | SURE化学感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
| MQ0024 | F-TOP10化学感受态细胞 | 20×100μl/100×100μl |
| MQ0025 | DH5α电击感受态细胞 | 5×50μl/20×50μl |
| MQ0030 | DH10B电击感受态细胞 | 5×50μl/20×50μl |
| BTN160685A | 零背景通用型克隆试剂盒(Amp抗性) | 25次 |
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文献和实验出来，可能两个原因，第一个是抗体不好，第二个可能是质粒没做好，发生移码了，因为你用的是pEGFP-N2载体，gfp是在n端，就算发生了移码一样可以检测到绿色萤光，仔细检查下你做的质粒看看是否正确。 liuruya 谢谢大家的回复 1.WB应该是没有技术问题，用的是GFP或flag的标签抗体，而且设置了之前做过的基因做阳性对照 2.GFP质粒测序过是完整的且没有移码，flag的是自己构建的也反复check过没有问题 觉得很妖怪 问了当时给我质粒
也可以，这样用一个启动子CMV同时表达两个蛋白，而不是融合蛋白。 liuyicheng84427 VEGF应该加在GFP的N端还是C端？ lmnsmu VEGF加在GFP的N端或C端均可以，而且有一些载体如pEGFP-N1或pEGFP-C1在N端或C端已经有GFP的序列，只需将你的目的基因序列插入到MCS区即可融合表达。 naj2007 多谢大家！ hiqihong
的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点，FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。 由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，这一系统已用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody （货号#E022060 ）可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag
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