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RT
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大量
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上海机纯实业有限公司
- 规格:
1L
Western转移缓冲液又称蛋白印迹转移缓冲液或转膜缓冲液,适用于Western Blot实验中把蛋白质转移到PVDF膜或硝酸纤维素(NC)膜上,以便进行抗体的孵育和下游实验。
操作步骤(仅供参考):
1、 取1L包装的Western转移缓冲粉剂,充分溶解于去离子水,即为1×Western转移缓冲液。
2、 按1×Western转移缓冲液:无水=4:1的比例Western转移配制工作液。大多数情况下取1×Western转移缓冲液480ml加入120ml即可。
3、 大多数蛋白质转移,应置于4℃进行,以防止蛋白降解。
注意事项:
尽量选择优级,分析纯也可使用。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。A
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文献和实验杂交膜的选择是决定 Western blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转 移蛋白的特性以及分子大小等因素,选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western blot的膜主要有两种:硝酸纤维素膜(NC) 和 PVDF 膜。NC 膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物,在低离子转移缓冲液的环境下,大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起, 但在非离子型的去污剂作用 下,结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小,选择不同孔 径的 NC 膜。因为随着膜孔径的不断
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免疫印迹(Western Blotting)的基本原理及应用 免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术,在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物,然后利用抗原-抗体的特异性反应,从蛋白混合物中检测出目标蛋白,从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。Western blotting还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析,作为一种廉价、便捷、可靠的研究工具,将与质谱和蛋白质芯片等技术一起在蛋白质组时代发挥重要作用
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