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大量
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海机纯实业有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
100ml/500ml
| 规格: | 100ml | 产品价格: | ¥60.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 500ml | 产品价格: | ¥150.0 |
考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast staining solution)是以考马斯亮蓝G250为染料可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的快速染色,亦可用于Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
自备材料:
1、 水平摇床或侧摆摇床
2、 蒸馏水
3、 (可选)加热装置
4、 20%甘油水溶液
操作步骤(仅供参考):
1、PAGE电泳结束后取凝胶放入约50~100ml蒸馏水中,在摇床上摇动5min,弃液,重复上述步骤1次。
2、弃蒸馏水,加入3~5倍体积以上的Commassie Blue Fast staining solution,使染色液能盖住凝胶。
3、(可选)凝胶置于考马斯亮蓝快速染色液中,在水浴锅或微波炉内加热至95~100℃,立即从加热装置中取出。(此步骤可以使染色提高灵敏度或加快染色进程,亦可省略。)
4、在摇床上摇动染色,蛋白量大的条带10~15min左右会出现,大部分蛋白条带会在30~60min左右出现。一般情况下,5h能获得极佳效果。
5、出现清晰的目标蛋白条带即可停止染色,弃染色液。
6、加入适量的蒸馏水停止染色反应。亦可以在摇床上摇动脱色5~10min,以便减少背景干扰。
7、把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
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文献和实验-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次(对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤)。 加入预冷的 RIPA 液(含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂),RIPA 液的用量:按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注:悬浮细胞,收集
水研磨成匀浆,转移到 离心管 中,再用6mL 蒸馏水分次洗涤研钵,洗涤液收集于同一 离心管 中,放置0.5~1h 以充分提取,然后在4 000r/min 离心20min,弃去沉淀,上清液转入10mL 容量瓶,并以蒸馏水定容至刻度,即得待测样品提取液。 (2)测定:另取2 支10mL 具塞 试管 ,按下表取样。吸取提取液0.1mL(做一重复),放入具塞刻度 试管 中,加入5mL 考马斯亮蓝G-250 蛋白
----------------------------------------------【四】 考马斯亮蓝快速染色和脱色(极其好用!!!!!)考马斯亮蓝染色液 1000 mL:先称取考马斯亮蓝R250 1.0 g 于1000 mL试剂瓶内,加入甲醇450mL溶解,再加冰醋酸100 mL和双蒸水450 mL至大约1000 mL。室温可放置12个月以上。染色液可倒入专用的回收试剂瓶,届时加入适量甲醇、考马斯亮蓝和大约10 g/L的三氯乙酸后可重复使用。考马斯亮蓝脱色液 10 L:于10 L洁净塑料
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