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- 雅酶
- ZJ101L
- 2025年12月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
2500次（微孔）
BCA蛋白定量试剂盒
BCA Protein Assay Kit
本产品冰袋运输； BSA标准品 -20℃保存，其它组分4℃保存，保质期12个月。
货号规格
goodZJ101L 500次(微孔)
goodZJ101L 500次(微孔)×5
产品内容
产品特点
g
d准确性高——变异系数远小于考马斯亮蓝染色法；
gd线性范围宽——灵敏，检测范围：20~2,000 μg/mL；
gd兼容性好——与金属离子、还原剂、螯合剂及去污剂兼容性较好。
产品简介
goodBCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还原成Cu+，BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物，其在562 nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20~2,000 μg/mL。
使用说明
good◈以微孔酶标仪法为例：
gooddd2. 配置显色工作液：
gooddd1. a. 计算显色工作液总量：
goodgoodgoodd工作液总量 = (BSA标准品样本个数＋待测样本个数)×复孔数×每个样本显色工作液体积
gooddd1. a. 举例：BSA标准品样本个数为9个，待测样本个数3个，复孔数3个。
goodgoodgoodd显色工作液总量 = (9个BSA标准品样本＋3个待测样本)×3个复孔×200 μL(每个样本工作液体积) = 7.2 mL
gooddd1. b. 根据计算出的所需显色工作液用量，将试剂A和试剂B按照50:1的体积比，配制显色工作液，充分混匀。
gooddd1. b. 注意：1）由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1~2个孔的量；
gooddd1. b. 注意：2）新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24 h。
gooddd3. 定量检测
gooddd3. （1）将稀释后的标准品按0，1，2，4，6，8，10，15，20 μL分别加到96孔板中，加入用于稀释标准品的溶液补足到20 μL(为避免枪尖损失，可先补足稀释液后加入标准品)；
gooddd3. （2）将样品适当稀释(可以多作几个梯度，如2倍、4倍、8倍稀释)，加20 μL到96孔板的样品孔中；
gooddd3. （3）各孔加入200 μL显色工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30 min，冷却至室温；
gooddd3. （3）注意：也可以室温放置2 h，或60℃放置30 min。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白浓度较低，可在较高温度孵育，或延长孵育时间。
gooddd3. （4）用酶标仪测定每个样品及BSA标准品的A562，或540~590 nm之间的其它波长的吸光度，注意要减去空白对照(稀释液＋工作液)的吸光度。
gooddd3. （5）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
gooddd3. （3）注意：数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。
注意事项
干扰物质附表
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BCA Protein Assay Kit
本产品冰袋运输； BSA标准品 -20℃保存，其它组分4℃保存，保质期12个月。
货号规格
goodZJ101L 500次(微孔)
goodZJ101L 500次(微孔)×5
产品内容
| 组分 | ZJ101 | ZJ101L |
| 试剂A | 100 mL | 100 mL×5 |
| 试剂B | 3 mL | 3 mL×5 |
| BSA标准品(5mg/mL) | 1 mL | 1 mL×5 |
产品特点
g
d准确性高——变异系数远小于考马斯亮蓝染色法；
g
d线性范围宽——灵敏，检测范围：20~2,000 μg/mL；
g
d兼容性好——与金属离子、还原剂、螯合剂及去污剂兼容性较好。产品简介
goodBCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还原成Cu+，BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物，其在562 nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20~2,000 μg/mL。
使用说明
good◈以微孔酶标仪法为例：
gooddd1. 稀释BSA标准品：
gooddd1. 取120 μL蛋白标准品(需完全融解)，用与待测蛋白样品相一致的稀释液稀释至300 μL，使终浓度为2 mg/mL。
注意：为方便起见，也可以用0.9%生理盐水或PBS缓冲液稀释标准品。
gooddd1. 取120 μL蛋白标准品(需完全融解)，用与待测蛋白样品相一致的稀释液稀释至300 μL，使终浓度为2 mg/mL。
gooddd2. 配置显色工作液：
gooddd1. a. 计算显色工作液总量：
goodgoodgoodd工作液总量 = (BSA标准品样本个数＋待测样本个数)×复孔数×每个样本显色工作液体积
gooddd1. a. 举例：BSA标准品样本个数为9个，待测样本个数3个，复孔数3个。
goodgoodgoodd显色工作液总量 = (9个BSA标准品样本＋3个待测样本)×3个复孔×200 μL(每个样本工作液体积) = 7.2 mL
gooddd1. b. 根据计算出的所需显色工作液用量，将试剂A和试剂B按照50:1的体积比，配制显色工作液，充分混匀。
gooddd1. b. 注意：1）由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1~2个孔的量；
gooddd1. b. 注意：2）新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24 h。
gooddd3. 定量检测
gooddd3. （1）将稀释后的标准品按0，1，2，4，6，8，10，15，20 μL分别加到96孔板中，加入用于稀释标准品的溶液补足到20 μL(为避免枪尖损失，可先补足稀释液后加入标准品)；
| 孔号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | ||
| 稀释后的标准品(μL) | 0 | 1 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 15 | 20 | ||
| 稀释液(μL) | 20 | 19 | 18 | 16 | 14 | 12 | 10 | 5 | 0 | ||
| BSA终浓度(μg/mL) | 0 | 100 | 200 | 400 | 600 | 800 | 1000 | 1500 | 2000 |
gooddd3. （2）将样品适当稀释(可以多作几个梯度，如2倍、4倍、8倍稀释)，加20 μL到96孔板的样品孔中；
gooddd3. （3）各孔加入200 μL显色工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30 min，冷却至室温；
gooddd3. （3）注意：也可以室温放置2 h，或60℃放置30 min。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白浓度较低，可在较高温度孵育，或延长孵育时间。
gooddd3. （4）用酶标仪测定每个样品及BSA标准品的A562，或540~590 nm之间的其它波长的吸光度，注意要减去空白对照(稀释液＋工作液)的吸光度。
gooddd3. （5）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
gooddd3. （3）注意：数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。
注意事项
good1. 本产品可以采用酶标仪(微孔检测法)或者分光光度计(试管检测法)测定蛋白浓度，如使用普通的分光光度计测定，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使其不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少；
good2. 试剂在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使其溶解；
good3. 建议每次测定蛋白样品时，都须绘制标准曲线，以获得准确数据；
good4. BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)；
good5. 如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表)，可采用其它蛋白定量产品；
good6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
good7. 本产品仅限科研使用。
干扰物质附表
| 化合物 | 耐受浓度 | 化合物 | 耐受浓度 |
| 缓冲液 | 去垢剂和变性剂 | ||
| 乙酸盐 | 0.2 M | Brij35 | 1% |
| 甘氨酸 | 1 M | CHAPS | 1% |
| HEPES | 0.1 M | 盐酸胍 | 4 M |
| MES | 50 mM | NP-40 | 1% |
| MOPS | 50 mM | 辛葡糖 | 1% |
| 柠檬酸钠 | <1 mM | SDS | 1% |
| PIPES | 50 mM | Triton X-100 | 1% |
| 磷酸钠 | 0.1 M | 糖类 | |
| 乙酸钠 | 0.2 M pH5.5 | 葡萄糖 | 10 mM |
| TES | 50 mM | 蔗糖 | 1 M |
| Tris | 0.1 M | 螯合剂 | |
| 盐类 | EDTA | 10 mM | |
| 硫酸铵 | 干扰 | 还原剂 | |
| NaCl | 1 M | β-巯基乙醇 | 50 μM |
| 尿素 | 3 M | DTT | 1 mM |
| 极性化合物 | 其它 | ||
| DMSO | 5% | HCl/NaOH | 0.1 M |
| 甘油 | 10% | 脂类 | 干扰 |
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文献和实验相关实验
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蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功，或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存，需对细胞裂解液进行蛋白定量；为了判定蛋白的产量，需对纯化好的蛋白进行定量；为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记，同样需首先对蛋白样品进行定量，以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒，如BCA定量试剂盒等，操作起来，简便快捷。当然也有不少实验室，还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
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ZJ101L BCA蛋白定量试剂盒
￥888
