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豚鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
企业认证
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大量
wlb1100
2年
上海瓦兰生物
2-8℃
200ml/KIT
本品用于分离豚鼠脾脏淋巴细胞。
本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启封后置常温保存。如 4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。
规格:4 ×200mL/kit保存:室温避光储存,有效期至少2年。启封后置4℃保存,有效期一周。试剂盒内容:样本稀释液 200mL细胞清洗液 200mL淋巴细胞分离液 200mL试剂F 200mL说明书 1 份一、 脾脏组织单细胞悬液的制备方法注:A.全过程及所需试剂要求无菌环境。 B.本试剂盒中不包含胶原酶,若采用酶消化法制备单细胞悬液,请用户根据各实验室要求另购不同类型胶原酶。1. 剪碎法:将组织块放入平皿后,加入少量F液及20%胎牛血清;用眼科剪将组织剪至匀浆状,加入5mL F液及20%胎牛血清;用吸管吸取组织匀浆,用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内;离心沉淀1500转/分×3 min,再用细胞清洗液清洗3次,每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片,以200目不锈钢滤网(另购)过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×107个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×108~1×109个/mL的单细胞悬液备用。2. 匀浆器法:用眼科剪将组织剪成小块;放入70mL组织研磨器内,加入2mLF液及20%胎牛血清;缓慢转动研棒,研磨至匀浆;用5mLF液及20%胎牛血清冲洗研器;收集细胞悬液,经200目不锈钢滤网(另购)过滤;离心沉淀800rpm×2min ,再用细胞清洗液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×107个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×108~1×109个/mL的单细胞悬液备用。3. 酶消化法: A.用F液将胶原酶稀释,终浓度为400 U/mL,至于冰浴备用。 B.取一适当大小培养皿进行操作:用镊子夹碎动物脾脏,加入稀释后的胶原酶,37℃消化20分钟。 C.以100或200目不锈钢滤网(另购)过滤,离心沉淀800prm×2min ,再用细胞清洗液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×107个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×108~1×109个/mL的单细胞悬液备用。细胞计数方法: 细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。既可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。
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