豚鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒

一、 脾脏组织单细胞悬液的制备方法
注：A．全过程及所需试剂要求无菌环境。
    B．本试剂盒中不包含胶原酶，若采用酶消化法制备单细胞悬液，请用户根据各实验室要求另购不同类型胶原酶。
1. 剪碎法：将组织块放入平皿后，加入少量F液及20%胎牛血清；用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入5mL F液及20%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内；离心沉淀1500转/分×3 min，再用细胞清洗液清洗3次，每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片，以200目不锈钢滤网（另购）过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×108~1×109个/mL的单细胞悬液备用。
2. 匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入70mL组织研磨器内，加入2mLF液及20%胎牛血清；缓慢转动研棒，研磨至匀浆；用5mLF液及20%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液，经200目不锈钢滤网（另购）过滤；离心沉淀800rpm×2min ，再用细胞清洗液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×108~1×109个/mL的单细胞悬液备用。
3. 酶消化法：     
A．用F液将胶原酶稀释，终浓度为400 U/mL，至于冰浴备用。 
B．取一适当大小培养皿进行操作：用镊子夹碎动物脾脏，加入稀释后的胶原酶，37℃消化20分钟。 
C．以100或200目不锈钢滤网（另购）过滤，离心沉淀800prm×2min ，再用细胞清洗液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×108~1×109个/mL的单细胞悬液备用。
细胞计数方法:     
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。既可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。