2×PCR Master Mix（含Taq酶，buffer，

特别提示：包括2×PCR Master Mix（含Taq酶，buffer，dNTP）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×PCR Master Mix（含Taq酶，buffer，dNTP）
英文名称：2×PCR Master Mix
产品货号：YT378
产品规格：400次

2X PCR Master Mix中含有2X Taq DNA Polymerase，2X PCR Buffer，2XdNTP，只需加入适量引物、模板和水即可进行PCR扩增。大大简化了PCR操作，使操作更加快捷，也减少了PCR操作过程中可能导致的污染，使PCR的重复性更好。

利用2X PCR Master Mix可以进行各种常规的PCR扩增，特别适合用于定性和半定量的PCR扩增，以及2kb以下DNA片段的T载体克隆。

2X PCR Master Mix可以扩增出长达8kb的片段，但通常更适合用于扩增2kb以下的DNA片段。

本产品稳定性高，经测试，反复冻融15次后对PCR的扩增效果无显著影响。

本试剂盒用于50微升的PCR反应体系，足够用于160个反应；用于20微升的PCR反应体系，足够用于400个反应。

注意事项：
1）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2）Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10-5，对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、YT Taq DNA polymerase等。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Taq DNA polymerase是zuì佳选择。
3）尽管本产品经过15次反复冻融后仍具有和冻融前几乎相同的PCR扩增效果，但仍宜适当避免反复冻融本产品，多次反复冻融可能使产品性能下降。
4）使用本产品前，一定要完全融化，并上下颠倒轻轻混匀后才能使用，尽量避免起泡。

储存条件：-20℃。

除了2×PCR Master Mix（含Taq酶，buffer，dNTP）,，我公司还供应以下相关产品：



名称：dNTP溶液(10mM)
货号：BTN51208B
规格：0.5mL
本产品是dATP、dTTP、dGTP、dCTP四种核苷酸的混合液，每种核苷酸的浓度为10mM，纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。使用浓度根据具体的反应决定，请参考相关手册。



储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

DNA为何使用2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶？
 DNA为何不选择现成的光合作用产物核糖和合成RNA的原料尿嘧啶(uracil)分别作为其糖分子和碱基，而去选择需要额外的合成步骤才能得到的2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶(thymine)，其原因何在呢？目前的主流观点是：DNA不能选择核糖的原因之一是由于核糖2"位置上的OH基团会使得到的双螺旋骨架结构不均匀、不平行，难以有效地折叠进染色体结构中，而使用2"-脱氧核糖则能得到均匀平行的双螺旋结构；原因之二是核糖2"位置上的OH基团会对邻近的磷酸二酯键进行分子内亲核攻击，降低分子的稳定性，而对遗传物质来说稳定性十分重要，所以DNA选择了失去分子内亲核攻击能力的2"-脱氧核糖。对信使分子而言，稳定性并不重要，所以RNA仍然使用核糖。
 DNA使用胸腺嘧啶的原因是DNA中的胞嘧啶(cytosine)会缓慢水解变成尿嘧啶，如果尿嘧啶也是DNA的正常组成成份，则DNA修复系统就不能区分哪些尿嘧啶是正常的，哪些是需要修复的。使用胸腺嘧啶(比尿嘧啶分子多一个甲基)不但能保持跟尿嘧啶一样的形成碱基对的能力，同时又能跟尿嘧啶区别开来，使DNA分子中出现的任何尿嘧啶都能被尿嘧啶DNA糖苷酶(uracil-DNA glycosylase)发现和修复。

名称：dCTP溶液(100mM)
货号：YT386
规格：250μl
dCTP即2"-deoxycytidine 5"-triphosphate，中文名为脱氧胞苷三磷酸，常用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反应、DNA测序、DNA标记等各种常规分子生物学反应。

分子式：C9H13N3O13P3Na3
分子量：533.1(酸形式的分子量为467.1)
dCTP的zuì大吸收波长：271nm。

本dCTP溶液用超纯水配制，并用高纯度NaOH溶液调节pH值至7.0，浓度为100mM，即100mmol/L。
本dCTP溶液不含DNase、RNase、phosphatase和蛋白酶。
本dCTP溶液经测试，可以直接用于PCR等各种常规分子生物学反应。

储存条件：-20℃。

名称：超纯dNTP混合液(10 mM)
货号：WE0160
规格：1ml|5ml
  本产品是dATP、dGTP、dCTP、dTTP的等摩尔数混合物(各10mM)，可与所有的耐热聚合酶配套使用。UltraPure dNTP纯度均达到99%以上。

使用方法：
UltraPure dNTP(10 mM each)可直接使用，或用调节至中性(PH7.5 左右)的无菌超纯水稀释至适当浓度使用。可用于要求较高的PCR反应(如Real-time PCR)、DNA序列测定、分子标记、cDNA合成等。

储存条件：-20℃。

名称：热启动PCR Master Mix(含染料)
货号：SY0034
规格：1ml×5
HotStart PCR Master Mix是即用型的PCR预混合溶液，含有HotStart DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Mix中加入电泳缓冲液和染料，使得PCR产物可以直接进行电泳，染料的存在不会干扰扩增效率。体系中含有的保护剂使得Mix经过反复冻融后仍可维持酶的活性以及产品的稳定性。PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子作为模板/引物，在74ºC，30min内摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以30 pg人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。35个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。

名称：2×Hot Start Taq PCR MasterMix
货号：JN0038
规格：1ml×5
  本制品是将PCR反应所需的HotStart Taq酶、dNTP混合物、MgCl2 以及反应缓冲液预先配制成2倍浓度的混合物。使用时只需加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，大大地简化了操作过程，减少了PCR操作过程中的污染。本制品所使用的HotStart Taq是经特殊工艺处理后的Taq酶，在加热至高温前，其聚合酶活性被抑制，从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物具有3′端"A"突出，因此可直接克隆于T载体中。

产品特点：
1、简便：与常规热启动Taq酶反应条件一致，无需改变扩增程序。
2、高效：有效减少了杂带及拖带产生，从而实现高特异性的PCR。
3、灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段（图例二）。
4、稳定：经测试，反复冻融40次后，扩增性能仍不受影响。
5、快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

产品用途：
1、高特异性PCR反应；
2、复杂模板扩增；
3、Multiplex PCR；
4、基因组扩增检测。

应用实例：

图例一）50μl扩增体系中，以50ng人基因组DNA为模板，2×Hot Start Taq可对特定基因片段（170bp）进行高特异性扩增。
泳道M：DNA 2000 Ladder； 泳道1，2：普通Taq酶 1.25U； 泳道3，4： HotStart Taq酶，1.25U

图例二） 50μ l 扩增体系中，分别以50ng～0.05ng人基因组DNA为模板， 可对特定基因片段（380bp）进行很好 的扩增。
泳道1：50ng； 泳道2：5ng； 泳道3：0.5ng； 泳道4：0.05ng；泳道M：DNA 2000 Ladder

常用反应体系(50μl)：

组分	体积
2×PCR MasterMix*	25μl
上游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
模板	1-50ng（质粒）
	10ng-1μg(基因组)
ddH2O	至50μl
*Mg2+终浓度为2mM

常用PCR循环：

当扩增片段＜3K：
94℃	10分钟
30次循环	94℃,30秒 57℃,30秒 72℃根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温
当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：
94℃	10分钟
30次循环	94℃,5秒 68℃根据产物长度调整,60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

PCR MasterMix选购指南：

编号	产品名称	特点
适用于菌落鉴定、菌液鉴定及常规PCR鉴定实验的Mix系列
JN0030	2×Taq PCR MasterMix	高性价比PCR Mix，使用简便，扩增灵敏度高
JN0034	2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0030改进版，性能更均衡，适用面更广
JN0040	2×Fast Taq PCR MasterMix	zuì快速的PCR试剂，常规PCR鉴定45分钟内知道结果
JN0035	2×RoomTop Taq PCR MasterMix	可放在手边的PCR试剂，室温稳定存放60天
JN0036	2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	室温稳定存放60天，高速PCR试剂，常规PCR鉴定45分钟内知道结果
适用于一些较难扩增的PCR条带的鉴定及短片段克隆
JN0032	2×Taq Plus PCR MasterMix	扩增效率更高及较好的保真度
JN0038	2×Hot Start Taq PCR MasterMix	采用热启动Taq，可获得很好的特异性
JN0041	2×Ultra Taq PCR MasterMix	高速扩增酶，优化配方，解决PCR扩增难题的，灵敏度高
高保真酶试剂，适用于长片段基因克隆
JN0031	2×Pfu PCR MasterMix	采用高保真酶，适用于基因克隆
JN0043	2×Fast Pfu PCR MasterMix	采用改良型高保真酶，更好的扩增效果，4倍扩增速度；扩增迅速
防止PCR产物二次污染、极高检测灵敏度的PCR试剂
JN0047	2×PCR MasterMix(防污染)	采用dUTP/UDG酶系统，从根本上杜绝PCR产物二次污染
JN0033	2×Genotyping PCR Kit（nomal）	极高检测灵敏度，可达到普通PCR试剂102至104倍扩增灵敏度

PCR MasterMix性能对比表：

名称	编号	扩增时间	扩增长度	是否有3"-A	基因组扩增
2×Taq PCR MasterMix	JN0030	1min/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Taq PCR MasterMix	JN0035	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0034	1min/kb	≤8kb	√	+
2×Fast Taq PCR MasterMix	JN0040	15s/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	JN0036	15s/kb	≤8kb	√	++
2×Ultra Taq PCR MasterMix	JN0041	15s/kb	≤8kb	√	+++
2×Taq Plus PCR MasterMix	JN0032	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix	JN0042	15s/kb	≤30kb	√	++++
2×Hot Start Taq PCR MasterMix	JN0038	1min/kb	≤8kb	√	++++
2×Hot Start Taq Plus PCR MasterMix	JN0039	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Pfu PCR MasterMix	JN0031	1min/kb	≤6kb	×	+
2×Fast Pfu PCR MasterMix	JN0043	30min/kb	≤12kb	×	+
2×SYBR Green Realtime PCR MasterMix	JN0049	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Genotyping PCR Kit（Normal）	JN0033	1min/kb	≤8kb	√	+++++
2×Genotyping PCR Kit（Fast）	JN0044	15s/kb	≤8kb	√	+++++
2×PCR MasterMix(防污染)	JN0047	1min/kb	≤8kb	√	+