总RNA提取试剂

特别提示：包括总RNA提取试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：总RNA提取试剂
英文名称：Resgent (Trizol Substitute)
产品货号：QN0927
产品规格：100mL|500mL

本试剂是一种通用的总RNA提取试剂，适用于动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提，可有效防止RNA在提取过程中的降解。获得的RNA可直接用于Northern杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase保护实验，RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。该试剂可用于100次总RNA提取(10平方厘米细胞或100mg组织)。

使用方法
自备新开封或专用*仿，异*醇，75%乙醇，DEPC处理水。
1. 细胞裂解或组织匀浆：
1)贴壁细胞：吸尽培养液，每10平方厘米(6孔板孔或35 mm平皿)细胞加入1ml本试剂,使其覆盖培养细胞，再用吸管或加样器吹打2～3次，细胞应完全裂解，然后转移至离心管中。
2)悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每五百万至一千万(5×106～1×107)动植物或酵母细胞，或一千万 (1×107)细菌，加入1ml本试剂 。用吸管或加样器吹打，使其完全裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，以确保其完全裂解。转移至离心管中。
3)组织：先将组织剪切成小块，放入玻璃匀浆器内。冷冻组织可在研钵中研磨匀浆。每50～100mg组织加入1ml本试剂 ，匀浆至完全裂解。转移至离心管中。
裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。室温放置5分钟。对于多糖、蛋白等杂质丰富的组织样品，匀浆后仍会存留有不溶物质，可12000g 4℃离心10分钟，然后吸取上清至一新的离心管中。
2. 分离：在装有裂解物的离心管中加入0.2倍体积的*仿(1ml本试剂加入0.2ml*仿)，振荡器上充分振荡混匀30秒，室温放置2-3分钟。12000g 4℃离心10分钟，然后吸取含总RNA的上层水相至一新的离心管中，每毫升本试剂 约可吸取0.5-0.6ml。有机相和中间层含有DNA和蛋白质，应避免触及。
3. 沉淀：按每ml本试剂加入0.5ml异*醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10分钟。12000g 4℃离心10分钟，在管底可见RNA沉淀。弃上清，按每毫升本试剂加入1ml 75%乙醇，轻轻颠倒混匀，以清洗RNA沉淀。12000g 4℃离心2分钟，弃去液体，小心勿丢弃RNA沉淀。室温倒置晾干5～10分钟。
4. 溶解：加入适量DEPC处理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。

注意事项：
1，RNA提取过程中所用器皿、离心管、吸头等应保证无污染无RNA酶。操作中应小心，防止外源性RNA酶污染样品导致RNA样品降解。
2，试剂中含有酚等有害物质，注意个人防护。

储存条件：4℃避光，有效期12个月

除了总RNA提取试剂,，我公司还供应以下相关产品：



名称：水样病毒沉淀剂
货号：BTN101118
规格：10次

名称：植物RNA提取专用高盐溶液
货号：BTN140402
规格：250mL
植物RNA溶液中常富含多糖、多酚，会阻碍和影响后续实验。本产品主要用于去除植物RNA溶液中的多糖、多酚。向已经提取的植物RNA溶液中或在使用植物RNA提取试剂盒(产品编号:BTN3080)提取植物RNA过程中加入本产品，再经过异*醇沉淀，可以达到去除多糖、多酚的目的，得到高纯度的RNA。本产品具有下列特点：
1. 本产品不含DNase和RNase。
2. 经本产品处理后的RNA纯度高，可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
3. 本产品不能用于小分子量RNA中多糖、多酚的去除，会严重影响小分子量RNA的回收率。
4.在处理微量RNA样品时，在去除多糖、多酚的同时，RNA损耗也较大，此时可以添加百奥莱博产品微量核酸沉淀剂(BTN50903)以提高回收率。

使用及效果：
取RNA样品0.5倍体积的本产品与RNA样品溶液混匀，加入等体积异*醇，室温放置10 min，12000rpm，4℃离心10 min，弃上清。加入1mL经RNase-free水配制的预冷的75％乙醇，12000rpm，4 ℃离心5 min。弃上清，室温干燥沉淀片刻。加入适量RNase-free水或TE Buffer溶解沉淀。


名称：*仿-*戊醇混合溶液
货号：BTN100804
规格：250mL
本品是*仿和*戊醇的24:1混合液，主要用于处理用饱和酚抽提过的核酸或蛋白质溶液，去除其中残留的酚。

储存条件：常温运输和保存、避光。有效期一年。

疑难解答：
Q：酚抽提后一定要用*仿抽提吗？
A：是。酚跟水互溶，所以用饱和酚抽提过的水相中还有残留的酚，如果直接从中沉淀核酸，酚就会污染样品，抑制很多后续的反应。如果再用*仿抽提，则可以去除残留的酚，因为*仿非极性很强，比重大，可以把水相的酚萃取出来并且离心时使有机相(酚*仿混合物)相处于下层，方便吸取位于上面的水相(*醚曾经用于此目的，但比重轻，不好取水相，所以现在基本没人使用)。
Q：*戊醇的作用为何？
A：用于消除振荡中形成的泡沫。

名称：总RNA提取试剂(组织/细胞/液体样本)
货号：ALH003
规格：50ml|100ml
本试剂是直接从来源于人，动植物，酵母，细菌和病毒的液体样品中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入*仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异*醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异*醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。

无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。本试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。本试剂抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。

本试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。

注意事项：
1. 当本试剂用量少于2ml时建议使用清洁的一次性的聚丙材质试管。
2. 当本试剂用量较大时，可以使用玻璃试管(Corex)或聚丙材质试管，事先检验以确保该试管可以耐受加入本试剂和*仿后12,000×g的离心力。不可使用有裂缝或者破损的试管。
3. 离心前小心平衡试管。
4. 离心前玻璃管口必须盖上铝箔并用石蜡膜封口，聚丙*管必须盖紧。
5. 从少量的组织(1~10mg)或细胞(102~104)中分离RNA 样品：调整样品体积到0.25ml，往组织或细胞中加入0.75ml 本试剂。待样品裂解后，加入*仿并进行步骤2 中的抽提操作。在用异*醇沉淀RNA 之前，加入5~10μg 无RNA 酶的glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度在加入*仿前用26 号注射器抽吸两次以切断基因组DNA。Glycogen 会留在水样层中并和RNA 共析出。在浓缩到4mg/ml之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会抑制PCR。
6. 在匀浆化后和加入*仿之前，样品可以在–60~–70℃ 保存至少一个月。RNA 沉淀（步骤4，RNA 漂洗）放置于75%的乙醇在2~8℃ 至少可以保存一周，在–5~–20℃下至少可保存一年。
7. 台式离心机最大能达到2,600×g 的离心力的，如果将离心时间延长到30~60 分钟可以满足步骤2 和步骤3 中的操作。

储存条件：4℃，有效期12个月。

本制品别名：人总RNA提取试剂|动物总RNA提取试剂|植物总RNA提取试剂|细菌总RNA提取试剂|酵母总RNA提取试剂