PCR级绿如蓝DNA染料

特别提示：包括PCR级绿如蓝DNA染料在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PCR级绿如蓝DNA染料
英文名称：DNAgreen, PCR Grade
产品货号：BTN70909
产品规格：0.1mL

第二代的非饱和型荧光染料(如SYBR Green I)在高浓度下会抑制荧光PCR，所以反应重复性很不稳定，并且不能用于要求严格的Tm分析。本产品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一样，是第三代饱和型荧光染料，在饱和浓度下也不抑制荧光PCR反应。

产品特点：
1. 饱和浓度不抑制PCR反应，因此得到的荧光信号更强。
2. 抗水解、抗热解和抗光解的能力强于目前最常用的SYBR Green I。
3. 饱和浓度下染料分子没有机会在DNA分子间发生移位，因此荧光强度跟DNA变性程度呈线性关系，可以用于精细的Tm 测定实验，如High-resolution melting curve analysis等。
4.跟目前常用的PCR 仪器(包括iCycler、LightCycler、ABI 测序仪)兼容。激发和发射光谱跟FAM和SYBR Green I 接近，可以使用SYBR Green I的光学设置参数。
5. 不能渗透进入细胞内，毒性和致突变性远低于SYBR Green I。
6.可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲线分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛细管电泳等研究。

储存条件：常温运输、-20℃避光保存，有效期一年。

使用方法：
先将本产品放置在室温融化，然后震荡10秒钟，短暂离心后待用。下面以50μL的标准PCR反应体系为例说明其使用：

1.在一干净的PCR 管中，加入下列成分：

试剂	加入量
10×PCR Buffer(No Mg2+)	5μl
MgCl2 50mM	2.5μl
dNTP 10mM	1μl
本产品(PCR级绿如蓝染料)	2.5μl
Taq DNA聚合酶	1-5U
DNA模板	适量
PCR引物	5-50 pmol each
补水到	50μl

2. 放入荧光PCR 仪中进行qPCR，并在退火或延长反应时记录荧光信号。使用的光学参数可以跟FAM或SYBR Green I 完全一样。

注意事项：
1. 如果使用iCycler，可以不加FAM；如果使用ABI系统，需要在Well Inspector选项下的非特异参照中选择“无”；使用LightCycler时，最好在PCR 体系中再加入终浓度为0.5mg/mL的BSA以降低仪器对染料和模板的非特异吸附。
2. 如果使用化学修饰过的Taq DNA聚合酶，可能需要减低KCl的浓度并提高Tris的浓度。

除了PCR级绿如蓝DNA染料,，我公司还供应以下相关产品：



名称：即用型荧光定量PCR试剂盒
货号：BTN90408
规格：1mL
本产品是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量PCR分析。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有实时定量PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应和HRM分析，具有广泛的用途。

产品特点：
1. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量PCR实验和HRM(High Resolution DNA Melt Curve Analysis)分析。而基于SYBR Green I和LC Green染料的qPCR mix则不能同时用于上述两种实验。
2. 使用第三代饱和型荧光染料，信号强，不会抑制PCR反应。
3.快捷，即用型的预配液使加样操作步骤大大简化，避免了交叉污染，降低实验误差。
4. 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能检测到浓度为50拷贝/mL的靶分子。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为6个月。

使用方法：

1.以20μl的qPCR反应体系为例：在一干净的PCR管中，加入下列成分：

反应体系成分	20μl体系	终浓度
qPCR MagicMix，2×	10μl	1×
自备引物一	xμl	0.1-0.5μM
自备引物二	xμl	0.1-0.5μM
自备模板	xμl
自备ROX	2μl	(可以不加)
补超纯水到	20μl

放入荧光PCR仪中进行扩增，并在退火或延长步骤中记录荧光信号。
注意：
a)通常引物浓度以0.2μm可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μm作为设定范围的参考；通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
b)ROX 校正染料：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×(即在每20μl反应体系中加2μl 10×ROX)。对ABI 7500，ROX的最佳浓度为0.05-0.1×(每20μl反应体系加0.1-0.2μl 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入1-2μl 1×ROX)。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。
对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000，RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。

2. 循环步骤：根据扩增子的性质和仪器性能，从以下三个过程中任选一个进行扩增。
两步快速循环法：适用于引物Tm值设计为60℃的反应

循环步骤	温度	时间	循环数
酶活化	95℃	10min	1
变性	95℃	15s	35-40
退火&延伸	60℃	1min

注意：本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
三步快速循环法：适用于延伸步骤温度高于退火步骤的PCR(长引物PCR)

循环步骤	温度	时间	循环数
酶活化	95℃	10min	1
变性	95℃	10s	35-40
退火	56-64℃	30s
延伸	72℃	32s

注意：
·退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原 因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。
·延伸温度：延伸温度设为72℃通常可以提高扩增效率。但是，对于AT含量大于70%的扩增子来说，延伸温度设为60℃为宜。
通用循环法：这种循环方法适用于几乎所有的荧光PCR仪，也适用于用快速循环法不能扩增的模版。

循环步骤	温度	时间	循环数
酶活化	96℃	10min	1
变性	96℃	15s	35-40
退火&延伸	60℃	1min

3. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。

注意事项：
1. 如果使用iCycler，可以不加入FAM。
2. 如果使用Roche LightCycler的玻璃毛细管进行PCR，需加入终浓度为0.5mg/mL的自备BSA。