PCR Master Mix (含染料)(国产,进口)

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")PCR Master Mix (含染料)(国产,进口)，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：PCR Master Mix (含染料)(国产,进口)
编号：SY0025
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：1ml
英文名：PCR Master Mix (With Dye)
PCR Master Mix是即用型的常规PCR预混合溶液，含有Taq DNA Polymerase，dNTP混合物，MgCl2以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。

Mix中加入电泳缓冲液和染料，使得PCR产物可以直接进行电泳，染料的存在不会干扰扩增效率。体系中含有的保护剂使得Master Mix 4ºC条件下长期放置，或经过反复冻融后仍可维持酶的活性以及产品的稳定性。PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子作为模板/引物，在74ºC，30min内摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。
稳定性检测： PCR Master Mix 分别在-20 ºC放置1年、4 ºC放置3个月、25 ºC放置1个月后，菌落PCR扩增1.2 kb片段。电泳结果显示2×PCR Master Mix具有非常好的稳定性。

 

操作注意事项
由于Taq DNA Polymerase室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系配制需在冰上进行。体系混匀后快速置于PCR仪进行反应。这样可以减少反应准备阶段的非特异扩增，有助于得到更好的PCR结果。

引物设计注意事项
1.引物3’端最后一个碱基选择C或G；
2.引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3.引物3’端尽量避免发卡结构的出现；
4.引物Tm值控制在55℃-65℃之间；
5.引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6.引物GC含量控制在40%-60%之间；
7.正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

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·DH5α化学感受态细胞
编号：SY0012
英文名称：DH5α Chemically Competent Cell
规格：100μl×10管
本品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg，广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。本品适用于蓝白斑筛选，另对recA1和endA1进行特定的改造使其更能保证克隆DNA的稳定性。

DH5α感受态细胞基因型：F-φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-arg ) U169 endA1 recA1 hsdR17 (rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1。

储存条件：-80℃
组份：
DH5α感受态细胞 100μl×10
pUC19(0.1 ng/μl) 5μl

注意事项
1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。

使用方法
1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
【注】：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用，应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
2）向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30min。
3）将离心管置于42℃水浴中放置45s~60s，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2min，该过程不要摇动离心管。
4） 向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min~60min（150 rpm）， 目的是促使菌体复苏，抗性基因表达。
5）将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃培养12-16 h。
【注】：涂布菌液多少可根据转化DNA量来调整。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，重新悬浮菌体后将其涂布在一个平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之内可重新涂板。


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·*苄青霉素*
编号：SY0287
英文名称：Ampicillin sodiu*(代"m") salt
规格：10g
本品为*苄青霉素*盐，细胞筛选常用的浓度为50-100μg/ml。Ampicillin，中文名*苄青霉素，同义名*苄西林，一种β-内酰胺类抗生素，属于青霉素家族的一员，同样敏感于β-内酰胺酶，后者可裂解*苄西林的β-内酰胺环。Ampicillin广谱抑制革兰氏阳性菌，阴性菌以及厌氧菌，其抑菌机制在于：干扰青霉素结合蛋白（penicillin binding protein，PBP）活性，PBP参与肽聚糖合成的最后一步，其可催化丙*酸和赖*酸残基间形成五甘*酸交联，此交联维持细胞壁的完整性，并维持细菌的正常生长。另外，Ampicillin仅对生长的大肠杆菌（Escherichia col）具有杀菌作用。

Ampicillin普遍用作细胞培养中的一种选择性抗生素，用于配制含*苄的LB或LB平板等，也可用于培养细胞的杀菌。Ampicillin抑制革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌，最小抑制浓度（MIC）分别为0.03-3 μg/ml和0.02 - 1.5 mg/ml。高压灭菌的琼脂或培养基需冷却到45-50℃再加入*苄青霉素溶液，含*苄青霉素的平板在2-8℃可保存2周。在 37℃培养条件下，*苄青霉素可稳定3天。




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甲醛凝胶加样缓冲液(10×,RNase free)   5ml
ARB12216 大鼠血小板生成素(TPO)代做ELISA实验 Rat thrombopoietin,tpo ELISA KIT
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