即用型免疫组化试剂盒(小鼠源一抗)(冰冻切片/石蜡切片)

特别提示：包括即用型免疫组化试剂盒(小鼠源一抗)(冰冻切片/石蜡切片)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：即用型免疫组化试剂盒(小鼠源一抗)(冰冻切片/石蜡切片)
英文名称：Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Mouse IgG
产品货号：ZN1828
产品规格：80T|160T

本试剂盒采用SABC系统，适用一抗为小鼠IgG，标本为培养细胞或冰冻切片的免疫组化。SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力，等电点 pI=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低。根据研究，大量的过氧化物酶可以保证 SABC 具有很高的敏感性。所以SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

冰冻切片和培养细胞做免疫组化时，由于内源性抗体的抗原性完好保存，一般免疫组化试剂盒就会碰到严重的背景染色问题，尤其是丙*固定的标本。本试剂盒所用的二抗是生物素标记的抗小鼠IgG，具有高度的特异性，不和小鼠以外任何抗体起反应，所以不会因二抗引起背景染色。此外，本试剂盒也能用于小鼠标本石蜡切片的免疫组化，背景染色优于普通试剂盒。

试剂盒组成：

组分	规格
5%BSA封闭液	6ml/12ml
生物素标记抗小鼠IgG	6ml/12ml
SABC	6ml/12ml

保存条件：4℃可保存一年，应避免冷冻。

冰冻切片染色步骤：
1. 取出切片，浸于 PBS 中复温30分钟。
2. 灭活。30%H2O2 1 份+纯*醇 50 份混合,室温浸泡10分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2 次。
3. 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4. 封闭。5%BSA封闭液 37℃孵育30分钟，甩干，勿洗。
5. 滴加一抗(小鼠IgG)，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5分钟×3次。
6. 滴加生物素标记抗小鼠IgG，37℃孵育30 分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。
7. 滴加 SABC，37℃孵育30分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。
8. 显色液显色，镜下控制反应时间。显色剂可选DAB(ZN1968)或AEC(ZN1963)。自来水充分冲洗。
9. 根据需要进行苏木素(ZN1971)复染，染色时间为0.5-2分钟。脱水，透明。
10. 选用中性树胶，水溶性封片剂(ZN2946)或其他适当的封片剂封片。

建议：
1. 热修复可选用枸橼酸盐缓冲液(ZN1955)、EDTA抗原修复液(ZN1951)、PBS缓冲液、TBS缓冲液(ZN1953)等作为抗原修复液。
2. 酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、抗原修复液Ⅰ(ZN1954，与热修复配合使用)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。

除了即用型免疫组化试剂盒(小鼠源一抗)(冰冻切片/石蜡切片),，我公司还供应以下相关产品：



名称：Western一抗二抗清除剂(弱碱性)
货号：YT072
规格：250ml
本品用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照，或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。

使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜，会导致蛋白信号的减弱。但是，本Western一抗二抗去除液，经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜3-5次。使用本试剂只需大约20-30分钟即可实现蛋白膜的重复使用，然后可以进行封闭等后续的Western操作。

百奥莱博的不同的Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。

抗体清除剂选型表：
 

产品编号	YT071	YT072	YT073	YT074
产品名称	Western一抗二抗清除剂(强碱性)	Western一抗二抗清除剂(弱碱性)	Western一抗二抗清除剂(中性)	Western一抗二抗清除剂(酸性)
产品包装	250ml	250ml	250ml	250ml
pH	强碱性	弱碱性	中性	酸性
对于膜上蛋白的保留效果	好	好	好	好
对于一抗二抗的去除效果	好	好	好	好
去除一抗二抗所需时间	15-20分钟	20-30分钟	20-30分钟	40-80分钟
适用膜的类型	PVDF和NC	PVDF和NC	仅PVDF	PVDF和NC
腐蚀性	强	弱	无	弱

用于普通的Western检测时蛋白膜上一抗二抗的去除可以任选一种去除液。如果是NC膜，即硝酸纤维素膜时，不宜选用YT071N。从时间角度考虑，强碱性、弱碱性和中性的去除液所需的时间都比较短，可以优先考虑。从价格因素考虑，强碱性的去除液性价比最高。从安全性考虑，中性的去除液由于没有腐蚀性而表现出更高的安全性。弱碱性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正确操作，并进行适当防护，使用强碱性的一抗二抗去除液也是完全可行的。
　　对于特定的抗原和抗体，很难说哪一种Western一抗二抗去除液的效果最好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时，可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间，同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液，以摸索出最佳的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。

注意事项：
1. 使用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶，任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。
2. 为取得最佳效果，推荐使用PVDF膜。但硝酸纤维素膜也可以使用本Western一抗二抗去除液。
3. 使用化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测， 例如DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。
4. 本Western一抗二抗去除液有轻微腐蚀性，使用时请注意防护。

储存条件：4℃，有效期一年。