Protein A+G琼脂糖凝胶

特别提示：包括Protein A+G琼脂糖凝胶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Protein A+G琼脂糖凝胶
英文名称：Protein A+G Agarose
产品规格：1ml

  本产品为Protein A和Protein G 共价交联到Agarose beads上的产物，并保存在20%乙醇溶液中。本产品包含1ml protein A+G agarose和1ml 20%乙醇溶液，即为50%悬浮介质。主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。免疫沉淀抗体包括Mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA，Rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c，Rabbit IgG，Rabbit and Goat polyclonal Abs，以及Human IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。本产品也可以用于抗体的纯化。

注意事项：
1、本产品保存在2～8℃ 20%的乙醇中，从低温取出后恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、使用前请充分颠倒若干次使混合均匀。

使用方法：

I 免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)：
1、蛋白样品的准备：
a. 对于细胞样品，用1×PBS洗涤一次。2×106细胞加入200μl细胞裂解液，以此类推。
b. 对于组织样品约20 mg加入200μl组织蛋白抽提试剂，以此类推。
注：如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释；如果蛋白样品浓度过低，可适当减少裂解液的用量。
2、取约200μg至1 mg蛋白样品，与0.2μg至2μg纯化后的抗体混合，4℃缓慢摇动过夜。
3、取20-40μl充分重悬的Protein A+G Agarose加入到一支新的1.5ml离心管中，短暂离心，小心吸弃上清。
4、加入500μl 1×PBS洗涤Protein A+G Agarose，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。
5、将步骤2的抗原抗体复合物加入到洗涤后的Protein A+G Agarose中，4℃孵育1-3个小时，短暂离心，小心吸弃上清。
6、加入500μl 1×PBS洗涤，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。
7、向沉淀中加入20-40μl 2×SDS-PAGE电泳上样缓冲液，涡旋重悬沉淀，短暂离心把样品离心至
8、蛋白煮沸变性5分钟，短暂离心后取部分或全部上清，用于SDS-PAGE电泳或Western Blot等。暂时不用的样品可在-20℃保存。

II 免疫共沉淀(CO-IP)：
参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(CO-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但以用新鲜的蛋白样品为佳。

储存条件：2～8℃，避免冻存。