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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
禽流感病毒H7亚型PCR检测试剂盒
- 保质期:
保存期限一年
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50次/盒
1. 即开即用,用户只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 两管式 RT-PCR,一次 RT 反应产物可以作为多次 PCR 的模板。本试剂盒提供 10 次的 RT 反应试剂和 50 次的 PCR 试剂。
3. 引物经过优化,特异性高,引物是根据基因的保守区域设计,适用于所有强、中、弱新城疫毒株,产物长度为 421 bp。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
禽流感病毒H7亚型PCR检测试剂盒特点优势:
1. 特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过GenBank及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到100%。
2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为100%。
3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1:序列资源丰富,除GenBank公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
6. 优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
禽流感病毒H7亚型PCR检测试剂盒性能指标:
1. 试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
规格及成分
| 成分 | 编号 | 50 次纸盒包装 |
| MMLV 逆转录酶 (含 RI) | 80206A | 20 μL |
| RT Buffer(含 dNTP) | 60906C | 60 uL |
| PCR Mix 3.0(含染料) | 90805 | 1.5 mL |
| ND 阳性对照 | 896897 | 50 μL |
| ND 专一性引物一(正向引物) | yw896 | 50 μL |
| ND 专一性引物二(反向引物) | yw897 | 50 μL |
| RNase-free 水 | 80403 | 1 mL |
| 使用手册 | 11-171201sc | 1 份 |
自备试剂:样品 RNA。
禽流感病毒H7亚型PCR检测试剂盒使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系):
| RNA 模板 | 0.01pg-500 ng (如果丌知道浓度则用 1-10 μL) |
| ND 专一性引物二(反向引物) | 2 μL |
| RNase-free 水 | 补水到 12 μL |
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。
三、PCR(60 μL 体系)
1、在 PCR 管中加入下列成分:
| 成 份 | 样品 | ND 阳性对照 | 阴性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 30 μL | 30 μL | 30 μL |
| cDNA 样品(上步的 RT 反应液) | 1-5 uL | 无 | 无 |
| ND 阳性对照 | 无 | 2 μL | 无 |
| ND 专一性引物一(正向引物) | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| ND 专一性引物二(反向引物) | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| 补水到 | 60 uL | ||
| 过程 | 温度 | 时间 | 其他 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | |
| PCR 反应 (40个循环) |
95℃ | 30 s | |
| 50℃ | 30 s | ||
| 72℃ | 40 s | ||
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min | |
1、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳,正确的扩增产物的大小为421 bp。
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文献和实验性禽流感 。该试剂包括检测 H5 抗原的酶联免疫试剂盒、胶体金试剂盒以及检测 H5 抗体的酶联免疫试剂盒在内,已经发展成为系列诊断试剂,既有能检测抗原的,也能检测抗体的;既能用于检测禽类,也能用于检测人;有 ELISA 法,也有胶体金法,根据不同的检测目的分别进行了试剂细化,能够满足不同检测目的的需要。该试剂具有灵敏度高、特异性好的显著特点,能及时、高效的检测出 H5N1 亚型禽流感病毒抗原或抗体,可检测标本包括排泄物、口鼻腔分泌物、鸡胚培养的完整病毒或裂解病毒以及血清,最快在 30 分钟 , 最迟
实验室检测和快速诊断的标准如《GB/T 19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.2-2004 H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.3-2004 H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》等。以上实时荧光定量PCR技术在禽流感检测方面的国家标准是该技术在当前的人感染猪流感诊断中应用的基础和前提。实时荧光定量PCR技术及在我国卫生应急中的应用要求实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative
一、目的流感病毒的MDCK细胞分离方法是流感实验的关键技术,用于流感病毒的分离、培养。本SOP是为确保MDCK细胞分离流感病毒的操作准确、规范和可靠而制定。二、范围适用于实验室所有技术人员进行流感病毒的MDCK细胞分离。三、程序(一)生物安全要求H5,H7亚型高致病性禽流感病毒,H2N2亚型流感病毒的MDCK细胞分离实验室生物安全级别:BSL-3。实验操作人员需进行BSL-3防护,具体详见“生物安全个人防护SOP”。H5,H7亚型高致病性禽流感病毒,H2N2亚型流感病毒的MDCK细胞分离操作
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