RNA提取试剂盒(富含纤维的组织)

特别提示：包括RNA提取试剂盒(富含纤维的组织)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：RNA提取试剂盒(富含纤维的组织)
英文名称：RNA extraction kit for fibrous tissue
产品货号：ALH031
产品规格：20次|50次

本试剂盒适用于快速提取心脏、骨骼肌、血管、气管、皮肤和其它纤维丰富的组织RNA，采用独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的*酚，氯*等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

试剂盒组份：

组份	20次	50次
裂解液RLT	20ml	50ml
去蛋白液RW1	15ml	40ml
漂洗液RW	5ml	10ml
RNase-free H2O	20ml	40ml
蛋白酶K(40mg/ml)(可选)	10mg	20mg
吸附柱和收集管	20套	50套

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 需要自备乙醇， β-巯基乙醇，一次性注射器，研钵，水浴锅等。
3. 裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase 污染，应注意以下几方面：
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA 在裂解液RLT中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）
5. 关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留,本试剂盒RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA 残留（一般电泳EB 染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA 表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA 清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1 漂洗前，直接在吸附柱 上进行DNase I 处理。请联系我们索取具体操作说明书。
6. RNA纯度及浓度检测：
完整性： RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA 不纯。
浓度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free 水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

储存条件：室温，有效期6个月

本制品别名：纤维类组织RNA提取试剂盒|心脏RNA提取试剂盒|骨骼肌RNA提取试剂盒|血管RNA提取试剂盒|气管RNA提取试剂盒|皮肤RNA提取试剂盒

除了RNA提取试剂盒(富含纤维的组织),纤维类组织RNA提取试剂盒|心脏RNA提取试剂盒|骨骼肌RNA提取试剂盒|血管RNA提取试剂盒|气管RNA提取试剂盒|皮肤RNA提取试剂盒，我公司还供应以下相关产品：



名称：粪便RNA柱式提取试剂盒
货号：BTN101109
规格：50次
由于粪便中有机质含量丰富，对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从粪便中提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。本产品是在粪便RNA提取试剂盒基础上开发的柱式粪便RNA提取产品。

试剂盒特点：
1. 操作比非柱式法更加简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. 去污染效果好，RNA 纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右。
3. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
4. 性价比高于进口的柱式粪便RNA提取产品。
5. 试剂无毒无害，环保。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
酸洗玻璃珠，400μm	25g
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期两年。

使用方法：
1.在自备的3-5mL离心管中称取0.5-1 g 粪便，加入0.5g 玻璃珠和1mL溶液A，盖紧离心盖后震荡器上剧烈震荡5-10分钟。注意：如果放置在低温，溶液A可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 稍微静置后将上清液(一般呈棕色)转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。所取上清液不要超过1mL，否则后续操作没有足够空间。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备氯*，在振荡器上振荡30秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000rpm离心3～5分钟。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入等体积的溶液C，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。
7.室温12000rpm离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
8. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，套入收集管中厚12000rpm室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
9. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，套入收集管中后12000rpm室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10. 加0.7mL 通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 加0.3mL 通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。此步可以省略。
12. 将离心吸附柱套入收集管中后室温离心半分钟，弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free 收集管中，加入30-100μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
14. 12000rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。