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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 抗体名:
泛素样蛋白NEDD8抗体
- 抗体英文名:
Anti-NEDD8
- 靶点:
详见说明书
- 浓度:
1mg/1ml
- 应用范围:
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
- 宿主:
详见说明书
- 供应商:
上海一研
- 库存:
58
- 级别:
详见说明书
- 目录编号:
详见说明书
- 抗原来源:
Rabbit
- 保质期:
详见说明书
- 适应物种:
详见说明书
- 标记物:
详见说明书
- 克隆性:
多克隆
- 保存条件:
Store at -20 °C
- 形态:
详见说明书
- 亚型:
IgG
- 免疫原:
KLH conjugated synthetic peptide derived from human NEDD8(38-75aa)
- 规格:
0.2ml/200μg
★分子生物学:质粒抽提、PCR、Q-PCR、RT-PCR、分子生物学:基因合成、引物合成、基因测序、载体构建等
★蛋白工程:原核、哺乳动物蛋白表达系统等
★病毒包装:腺病毒、慢病毒等
★抗体工程:磁珠分选、病理染色、WB、ELISA、IP、IF、IHC、FACS、Confocal等等
★细胞工程:细胞表型分析(凋亡、增殖、周期、迁移、侵袭、修复、克隆形成)、细胞培养、细胞膜制备、稳定细胞株构建、细胞RNAi技术等等。
泛素样蛋白NEDD8抗体抗体的生物素化标记实验要点:
1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L缓冲液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件;
3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等;
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;
6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及基,也可与糖基共价结合;
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。
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泛素样蛋白NEDD8抗体英文名称 Anti-NEDD8
中文名称 泛素样蛋白NEDD8抗体
别 名 NED8; NEDD 8; Neddylin; Neural precursor cell expressed developmentally down regulated 8; Neural precursor cell expressed developmentally down regulated gene 8; Rub1; Ubiquitin like protein Nedd 8; Ubiquitin like protein Nedd8.
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Pig, Cow
产品类型 一抗
研究领域 肿瘤 免疫学 神经生物学 信号转导 转录调节因子
蛋白分子量 predicted molecular weight:
8.5kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human NEDD8(38-75aa)
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
(石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
保存条件 Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Important Note This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 Ubiquitin like proteins fall into two classes:
the first class, ubiquitin-like modifiers (UBLs) function as modifiers in a manner analogous to that of ubiquitin. Examples of UBLs are SUMO, Rub1 (also called Nedd8), Apg12 and Hub1. Proteins of the second class include Parkin, RAD23 and DSK2, are designated ubiquitin domain proteins (UDPs). These proteins contain domains that are related to ubiquitin but are otherwise unrelated to each other. In contrast to UBLs, UDPs are not proteolytically processed or conjugated to other proteins. Rub1 and the corresponding human homolog NEDD8 are activated by the E1 ubiquitin activating enzyme UBA2, that forms isopeptide linkages between thio esters. NEDD8 shows 80% homology to ubiquitin. The best known targets of Rub1 modification are members of the cullin family. Cullins are subunits of an E3 ubiquitin ligase complex called the Skp1 /Cul1/Cdc53 F box (SCF). The SCF promotes transfer of ubiquitin from a ubiquitin conjugating enzyme (E2) to the target protein. Rub1 modification may regulate SCF function or localization.
Function :
Ubiquitin-like protein which plays an important role in cell cycle control and embryogenesis. Covalent attachment to its substrates requires prior activation by the E1 complex UBE1C-APPBP1 and linkage to the E2 enzyme UBE2M. Attachment of NEDD8 to cullins activates their associated E3 ubiquitin ligase activity, and thus promotes polyubiquitination and proteasomal degradation of cyclins and other regulatory proteins.
Subunit :
Directly interacts with NUB1 and AHR. Covalently attached to cullins and p53.
Subcellular Location :
Nucleus. Note=Mainly nuclear.
Tissue Specificity :
Highly expressed in heart, skeletal muscle, spleen, thymus, prostate, testis, ovary, colon and leukocytes.
Post-translational modifications :
Cleavage of precursor form by UCHL3 or SENP8 is necessary for function.
Similarity :
Belongs to the ubiquitin family.
泛素样蛋白NEDD8抗体抗体的鉴定:
1)抗体的效价鉴定:不管是用于诊断还是用于治疗,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应,琼脂扩散试验,酶联免疫吸附试验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
2)抗体的特异性鉴定:抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在IC50时的浓度,并按公式计算交叉反应率。
如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管,而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时,表示这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为0,即该血清的特异性较好。
3)抗体亲和力:是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小,抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键,疏水键,侧链相反电荷基因的库仑力,范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选,确定抗体的用途,验证抗体的均一性等均有重要意义。
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文献和实验发现:NEDD8 是脂肪细胞生成过程的关键元件,这一蛋白可以作为治疗肥胖症的潜在药物靶点 [1]。 NEDD8 全称 neural precursor cell expressed developmentally down- regulated 8 是一种能够对底物蛋白进行修饰的类泛素蛋白。其与底物蛋白的结合过程称为 neddylation。Neddylation 修饰与肿瘤细胞的增殖、转录因子的调控等高度相关
。epoxomicin 处理后,通过四种不同方法处理 HeLa 细胞裂解物 (150 g)。将得到的流穿 (F) 和洗脱 (E) 馏分进行体积归一化,与原始未处理裂解物 (H) 进行体积归一化,并选择相同体积进行蛋白印迹检测。与供应商 Cs kit 和基于抗体的方法相比,thermo Scientific Pierce 泛素富集试剂盒在洗脱组分中获得了更多的泛素化蛋白(在流穿组分中获得的蛋白较少),表明泛素化蛋白的富集效果明显更好。GSH 树脂是用于比较的阴性对照。4、S-nitrosylation: 一氧化氮
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