大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞

特别提示：包括大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞
英文名称：E.coli DH10Bac Chemical Competent Cell
产品货号：BTN140576
产品规格：0.1mL*10

 本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107CFU/μg。
 DH10Bac细胞包含亲本Bacmid bMON14272和辅助质粒 pMON7124。亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。
 辅助质粒包含tns ABCD 区域，该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒(pFastBac1，pFastBacDual等)含有Tn7R和Tn7L 同源重组臂，Tn7R和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac的重组质粒转化到DH10Bac细胞后，发生重组后就可产生重组Bacmid，提取纯化重组Bacmid转染昆虫细胞Sf9或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac细胞中的The φ80dlacZDM15基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组bacmid的蓝白斑筛选。
 菌株基因型为：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG/pMON14272/pMON7124。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，避免反复冻融，有效期半年。

自备试剂：重组质粒、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 制备含有如下抗生素的LB 固体平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10μg/mL tetracycline，100μg/mL X-gal，40μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
4. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
5. 每个离心管中加入900μl 无菌的SOC(不含抗生素)，混匀后置于37℃ 摇床，200rpm 振荡培养4小时。
6. 用 SOC培养基进行10倍梯度稀释，如分成3个稀释梯度10-1,10-2,10-3。
7. 取 100μl的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养24-48小时。
8. 保留剩余的菌液保存于4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

除了大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：Myc荧光素酶报告基因质粒
货号：YT450
规格：1μg
Myc报告基因质粒是用于检测Myc转录活性水平的报告基因质粒。Myc质粒是以pGL6-TA质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个Myc结合位点(E-box DNA binding element)，可以高灵敏度地检测Myc的激活水平。Myc可以和Max形成异源二聚体，结合到E-box DNA binding element，启动促进细胞增殖的基因转录。

pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

Myc质粒的主要信息如下：
 

Base pairs	5647
Myc response element	26-61
Minimal TA promoter (pTA)	84-106
luc2 reporter gene	148-1800
SV40 late poly(A) signal	1835-2056
SV40 early enhancer/promoter	2104-2522
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor) coding region	2547-3341
Synthetic poly(A) signal	3366-3414
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	3481-3500
ColE1-derived plasmid replication origin	3738
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	4529-5389
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5494-5647
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	5596-5615

Myc质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. Myc质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。
3. 可以激活Myc的试剂，可以用作Myc报告基因检测时的阳性对照。

储存条件：-20℃。