PE-BRDU细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)

特别提示：包括PE-BRDU细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PE-BRDU细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
英文名称：BrdU cell proliferation Detection Kit
产品货号：KFS325
产品规格：20T

本试剂盒细胞增殖检测是一个基于荧光检测的实验，可以监测细胞健康和通过胸苷掺合来估量DNA 合成从而监测细胞分裂。

溴脱氧尿苷(5-溴代-2"-脱氧尿苷, BrdU) 是一种合成的核苷酸即胸苷的类似物。BrdU 通常被用于检测活组织中再生的细胞。

BrdU 可以掺合到复制细胞中新的合成DNA 中（在细胞周期S 期），在DNA 复制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特异性抗体便可以用于检测这个插入的化学品，从而检测出细胞是否在复制其DNA。

除了PE-BRDU细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞凋亡染色试剂盒(细胞Hoechst染色)
货号：YT118
规格：100次
本试剂盒提供了一种经典而又快速简便的细胞凋亡检测方法。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。所以Hoechst 33258染色后，在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。典型的Hoechst 33258染色后的细胞图片参考下图。



试剂盒特点：
1. 只需25分钟即可完成细胞凋亡检测的整个过程。
2. 本试剂盒提供了固定液，染色液，及抗荧光淬灭封片液。
3. 本试剂盒对贴壁细胞，悬浮细胞和组织切片均适用。
4. 足够检测100个样品。

试剂盒组份：
固定液————————————50ml
Hoechst 33258染色液 —————50ml
抗荧光淬灭封片液 —————— 5ml

注意事项：
1. 需可以观察蓝色荧光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 需PBS或0.9%NaCl溶液。
3. 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
4. 在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。

储存条件：4℃，有效期6个月。

名称：Caspase 3分光光度法检测试剂盒
货号：KFS198
规格：20T|50T|100T
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-3 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3 为关键的执行分子，与DNA 断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被激活，活化的Caspase-3 由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。Caspase-3 分光光度法检测试剂盒就是将caspase-3 序列特异性的多肽偶联至发色基团。当该底物被Caspase-3 剪切后，发色基团即游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm或400nm）测定其吸光值，考察caspase-3 的活化程度。

注意事项
1. Caspase-3 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-3 活化的机制，这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-3 活性无明显改变，需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3~5×106 个或新鲜组织50~100mg，以便能达到测定需要的100~200μg 蛋白的要求，因为Caspase-3 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关，如测定的OD 值偏低，可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。

名称：JC-1线粒体膜电位荧光探针
货号：QN1290
规格：1mg|5mg
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψ m 的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1 为单体，可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。

线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC- 1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

JC-1 单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为529nm;JC-1 聚合物的最大激发波长为585nm，最大

JC-1用于检测细胞的线粒体膜电位时常用的浓度范围为1～20µg/mL，对于很多细胞适宜采用的JC-1浓度为10µg/mL 。

别名：JC-1荧光探针
CAS号：3520-43-2
分子式：C25H27Cl4IN4
分子量：652.23
纯度：≥95%(HPLC)
储存条件：-20℃干燥避光

名称：活细胞/死细胞双染试剂盒
货号：HR8289
规格：500T/1000T

名称：Caspase 1抑制剂
货号：HR0473
规格：200μl

名称：Caspase 2抑制剂
货号：HR0474
规格：200μl

名称：CFSE/PI双染细胞毒性检测试剂盒
货号：HR8302
规格：500T
CFSE/PI 双染细胞毒性检测试剂盒是利用细胞荧光染料CFSE(CFDA-SE)和PI对细胞进行染色，利用CFSE标记靶细胞，PI标记死的靶细胞来区分不同的细胞，活的靶细胞成绿色，死的靶细胞成红色和绿色，从而检测细胞毒性作用。根据不同的实验方案设计，可以用来检测化合物的细胞毒性作用。也可以用来检测杀伤性T 细胞或NK 细胞介导的细胞毒作用。
CFDA-SE 是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。CFDASE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFDASE在结构上将酚羟基部位改造成AM体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，进入细胞内的CFDASE的AM 部位能被细胞内酯酶水解生成CFSE，通过共价结合赖氨酸侧链的氨基而掺入细胞内和细胞表面的蛋白，且结合后发出强的绿色荧光。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。
CFSE毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。
CFSE/PI标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞毒性检测。
CFSE标记细胞呈绿色荧光，荧光波长：λex=496 nm,λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为516nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。PI标记细胞呈红色荧光，流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为647nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL2 detection channel。
CFSE标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞毒性外，还可单染后用于细胞增殖检测，或者用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。

储存条件：CFSE探针-20℃避光保存；溶解液-20℃保存；PI染色液2-8℃避光保存。
有效期：六个月。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS，HBSS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ● 96孔培养板 ● CO2培养箱 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
●染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。
● 配制的CFSE 母液极易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。
● CFSE工作液应现配现用，不能提前配制，因为CFSE 吸水会分解，影响染色效果。
● CFSE配制成储存母液后宜在一个月内使用完毕，最长不宜超过2个月。CFSE 易被水解，在水溶液中会很快变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。
● CFSE溶解液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。
● CFSE标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞，最佳标记时间需自行摸索。正式实验前，建议先做几个孔摸索染色浓度和加入CFSE试剂后的培养时间。
●荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
●以下实验步骤仅供参考，请根据实际的实验方案设计或参考相关文献为准。
试剂配制：
1．从冰箱中取出CFSE试剂，静置几分钟至室温。盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁几次，再离心几分钟让粉末充分落入管底后才能开盖。
2．取0.9 ml CFSE溶解液加到CFSE管中溶解，配制成CFSE母液。
【注】:
● 加入溶解液后请先盖上盖子，反复颠倒把盖子和管壁上的试剂洗到底部，并用移液器反复吹打使溶解完全。
● 冬天气温较低时CFSE溶解液会凝固，请先在37℃水浴至溶解液完全融解后再进行配制，配制过程中注意避免溶液凝固，保持温度至CFSE溶解完全。
细胞CFSE染色：
1．根据需要检测的细胞样品数，用HBSS 将CFSE 母液200-4000倍稀释，配制成CFSE染色工作液。不同的细胞需要根据预实验结果确定最佳染色浓度。如果荧光强度弱，可以适当提高CFSE的终浓度。如果背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。
【注】:
● 也可以用PBS等缓冲液或相应的无血清培养基稀释染料母液至所需浓度。
● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或培养基稀释CFSE 到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色终浓度200-4000倍稀释。
● 为了降低过度加载染料导致的潜在背景和细胞毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。
● 工作液现配现用。
2．将培养好的待测靶细胞消化后收集，用PBS 洗涤2次。(400g离心5分钟)
3．将待测细胞用染色工作液重悬，至细胞浓度大约107/ml。
4．在37℃培养箱中避光孵育15-20分钟。
5．加10倍体积的含血清培养基，400g离心5分钟。
6．离心后去上清，收集细胞，用HBSS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，最后加入培养基重悬细胞。
7．在37℃培养箱中孵育20-30分钟。
细胞模型制备：
1．收集待检测的靶细胞。
2．进行相应的毒性药物处理或者效应细胞处理。
【注】:
● 效应细胞和靶细胞比例根据需要自行设定。常见比例如6、25：1；12.5：1；25：1等。
● 活的靶细胞成绿色；死的靶细胞成红色和绿色；死的效应细胞成红色，活的效应细胞成无色。
细胞检测：
1．收集制备好的毒性处理过的细胞模型。
2．用500μl HBSS重悬细胞，加入10μl PI染色液，混匀。
3．在2-8℃避光孵育5-15分钟。
4．在400g离心5分钟收集细胞。
5．用500μl HBSS或PBS重悬细胞。
6．取500μl 细胞悬液，用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
7．根据流式结果计算死亡细胞百分率。被杀伤死亡的靶细胞被PI染上会出现在CFSE+PI+区域，未杀伤的在CFSE+PI-区域，得出被杀伤的靶细胞的比例。用这个比例再计算毒性。