Ad-GFP-LC3B

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销售Ad-GFP-LC3B，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

Ad-GFP-LC3B
英文名：adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：1ml|10×1ml
编号：YT159

Ad-GFP-LC3B是一种可以表达GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染细胞或组织后进行细胞自噬(autophagy)的检测。
LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 (MAP1LC3)。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族，其中对于LC3B的研究最为广泛。到目前为止，LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶(E1-like activating enzyme), 以ATG3为E2样连接酶(E2-like conjugation enzyme)，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶(E3-like ligase)，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体(autophagosome)的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其极强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来(LC3B dots or punctae)。
自噬(Autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等不利的环境条件下, 细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料, 促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。
Ad-GFP-LC3B是我公司自行研发的重组腺病毒，感染后能够在靶细胞中有效表达绿色荧光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈现明亮的绿色荧光，可以用于细胞自噬的检测。
腺病毒感染细胞后为瞬时表达，通常不会与基因组DNA重组，不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后，有效表达时间通常不少于7天，不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表达很可能会大大减弱。
我公司的Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重组腺病毒载体系统，感染普通的细胞后不能进行扩增和重组，从而可以有效降低本产品在活体生物中的风险。
本产品可以在表达E1的HEK293A、HEK293等适当细胞中扩增。
本产品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用时可以按照108pfu/ml进行计算。如果按照2 MOI感染6孔板的细胞，每孔50万细胞计算，共可以感染100个孔；如果按照2 MOI感染24孔板的细胞，每孔10万细胞计算，共可以感染500个孔。如果MOI值提高，则相应可以感染的孔数会减少。
保存条件：
-80℃保存，一年有效。-20度保存，1-2个月内有效。4℃保存，一周内有效。
注意事项：
反复冻融会降低病毒滴度，如有必要请在收到本产品后分装保存。病毒融解后，如果在一周内使用，可以放置于4℃。如果-80℃保存时间超过一年，可能会导致滴度下降，此时建议重新测定病毒滴度。
腺病毒感染需要细胞表面的CAR受体，请确认拟使用的细胞或组织可以被腺病毒感染。
本产品使用前请仔细阅读附录1《腺病毒使用安全规范》。本产品生物安全等级为Biosafety Level 1 (BSL-1)，没有确凿证据显示会导致健康成人产生疾病(Not known to consistently cause diseases in healthy adults)，可以按照常规的微生物实验操作要求进行操作(Standard microbiological practices)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

更多有关Ad-GFP-LC3B的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·EMSA突变探针-β-Catenin/TCF(10μM)
编号：YT217
规格：30μl

EMSA突变探针－β-Catenin/TCF是用于EMSA(也称gel shift)研究的β-Catenin/TCF consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针－β-Catenin/TCF的阴性对照，用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。
EMSA突变探针－β-Catenin/TCF的序列如下：
5’-CCC TTT GGC CTT ACC-3’
3’-GGG AAA CCG GAA TGG-5’
EMSA突变探针－β-Catenin/TCF中β-Catenin/TCF的公认的结合位点发生了突变，从而使β-Catenin/TCF无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和β-Catenin/TCF的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中，正常的标记探针和β-Catenin/TCF的结合的条带不会被抑制。
1,阴性对照反应(标记探针)；2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。
一个包装的突变探针，如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应，可以进行90-180个突变探针的冷竞争反应。如果用于生物素标记探针的冷竞争时，可以进行约30个冷竞争反应。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。



Ad-GFP-LC3B关键词：Ad-GFP-LC3B,YT159,百奥莱博
BL1276 4×非变性蛋白上样缓冲液
曲酸 Fmoc-Hyp-OH 501-30-4
57-48-7 D-果糖 D-Fructose
ARB12509 大鼠结缔组织生长因子(CTGF)ELISA代测服务 Rat connective tissue growth factor,ctgf ELISA KIT
ARB13647 兔子脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)Elisa方法检测 Rabbit deoxypyridinoline,dpd ELISA KIT
N-硝基-L-精氨酸 cis-Aconitic acid 2149-70-4
56-87-1 L-Lysine L-赖氨酸
SJ0449 Oligomycin 寡霉素
DP408 RNAStore样本保存液
BL1092 澳洲胎牛血清
碱性蓝26 D-Alanine Methyl Ester Hydrochloride 2580-56-5
嘌呤霉素盐酸盐 L-(+)-Lactic acid 58-58-2
D-(+)-苹果酸 Methyl red sodium salt 636-61-3
ARB12087 大鼠水通道蛋白3(AQP-3)检测服务 Rat aquaporin 3,aqp-3 ELISA KIT
F030439 胶体金标记山羊抗人IgG Fab抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG Fab*GOLD
苄脒盐酸盐 Calcein 1670-14-0
ARB13605 兔子肾上腺髓质素(ADM)含量检测 Rabbit soluble endothelial protein c receptor,sepcr ELISA KIT
ARB11676 人趋化因子(frActAlkIne/CX3CL1)酶联免疫定量检测 Human fractalkine/cx3cl1 ELISA KIT
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·CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)
编号：YT310
英文名称：Cu/Zn-SOD and Mn-SOD Assay Kit with WST- 8
规格：100次

CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)是一种基于WST-8的显色反应，通过比色来检测细胞、组织或其它样品中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD或总SOD活性的试剂盒。
超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase,SOD)能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢(H2O2)和氧气(O2)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。
目前有多种SOD活性测定法，其中NBT(氮蓝四唑)法由于使用方便而被广泛使用。但NBT法产生的甲臜染料水溶性差，易和被还原的黄嘌呤氧化酶相互作用，抑制百分率达不到100%等，从而使检测的灵敏度和精确度受到影响；细胞色素C法也是一种常用来检测SOD活性的方法，但细胞色素C其氧化活性高，易受样品中的还原剂干扰，另外该方法需要连续测定吸光度值，对于SOD的检测灵敏度比较低，并且不太适合大批量样本的检测。
目前测定SOD比较先进的方法包括WST-1法和WST-8法，其中WST-8法比WST-1法更加稳定、灵敏度更高。本试剂盒采用了目前测定SOD方法中稳定性更好、灵敏度更高的的WST-8法。WST-8法的原理参考下图，WST-8可以和黄嘌呤氧化酶催化产生的超氧化物阴离子反应产生水溶性的甲臜染料(formazan dye)，该反应步骤可以被SOD所抑制。通过对WST-8产物的比色分析即可计算SOD的酶活力。
基于黄嘌呤氧化酶藕联反应体系和WST-8的SOD酶活力检测原理图。XO：xanthine oxidase。
WST-8的反应产物是稳定的水溶性产物，可以通过单个时间点的吸光度检测来测定SOD活力，适合高通量筛选研究。同时WST-8法测定SOD酶活力时，最大抑制百分率可以接近100%，并且可以不受一些常见的干扰因素的干扰，使检测效果比其它的一些常见方法显著改善。
本试剂盒的检测不受样品中过氧化氢的干扰。很多细胞和组织样品中含有内源性的过氧化氢，会干扰SOD的检测。本试剂盒通过添加适量过氧化氢酶等特殊方法，能有效去除常规样品中过氧化氢的干扰。例如，对于SOD标准品的检测，标准品中添加高达0.1mM的过氧化氢时，对于检测结果仍无显著影响。
哺乳动物编码3种SOD。在大部分组织中，含量最高的是定位在细胞浆中的Cu/Zn-SOD。Mn-SOD主要表达在线粒体中，并且Mn-SOD是可以被诱导表达的。Mn-SOD在某些情况下也可以定位在细胞浆中。有些组织或体液中会含有第三种SOD，extracellular SOD，简称EC-SOD。EC-SOD也是一种Cu/Zn-SOD，和编码细胞浆Cu/Zn-SOD的基因相似性很高，但有所不同。综上所述，细胞或组织内共有两类SOD，即铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)。这两种SOD酶活性的总量就是总SOD的酶活性。当用Cu/Zn-SOD的抑制剂抑制其酶活性时测定得到的就是Mn-SOD的酶活性。如果此时同时测定总的SOD酶活性，就可以计算出Cu/Zn-SOD的酶活性。
KCN或NaCN可抑制CuZn-SOD酶活性，也被大量用于测定Mn-SOD的酶活性。 但KCN或NaCN都具有剧毒，并且对Cu/Zn-SOD的抑制百分比达不到很接近100%。
本试剂盒采用了一种无毒的两步双重抑制Cu/Zn-SOD的方法，在避免使用有毒药品的情况下同时确保了对于Cu/Zn-SOD的抑制百分比达到高度接近100%，即对于Cu/Zn-SOD的抑制效果显著优于KCN或NaCN。使对于Cu/Zn-SOD或Mn-SOD酶活力的测定更加安全和准确。
本试剂盒可以检测细胞或组织匀浆液上清、全血、红细胞抽提物、血清等生物样品中的SOD活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
保存条件：
-20℃保存，半年有效。S0103-2 WST-8溶液需避光保存。
注意事项：
待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。
细胞或组织等样品制备时不能采用含有Triton X-100等去垢剂的溶液，否则会干扰本试剂盒的检测。
抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰，例如0.1mM ascorbic acid，5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色，如果设置了使用说明中的空白对照3，就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
Cu/Zn-SOD抑制剂A对人体有刺激性，使用时请注意适当防护。

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