北京CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒厂家

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒厂家
英文名：Cell Counting Kit-8
编号：BTN121205
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本CCK-8试剂盒是基于WTS-8的第二代细胞增殖及毒性检测产品，主要成分为水溶性四唑盐WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝*基)-3-(4-硝*基)-5-(2,4-二磺基*)-2H-四唑单*盐，WST-8为一种MTT类似物，在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成橙黄色水溶性的甲臜(formazan)。生成的甲臜量与活细胞数量成线性相关。

产品特点：
1．溶液稳定，对细胞无毒性，可直接同步加入到细胞样品中长时间孵育，可以多次测定选取最佳测定时间。
2．灵敏度高，实验的灵敏度比其它如MTT，XTT或MTS高，操作简便、快捷，实验结果重复性好。
3．水溶性，免去后续的溶解步骤。
4．不需要换液，尤其适合于悬浮细胞。
5．安全无毒，不会对操作人员身体造成危害。
6．可以广泛应用于生物活性因子的活性检测、药物的筛选、细胞增殖检测、细胞毒性。

储存条件：常温运输和4 ℃干燥避光保存，有效期一年。

使用方法：

一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时测定细胞具体数量时)
1．先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2．按比例(例如：1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3．接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加 CCK 试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间)。

二、细胞活性检测
1．在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板在培养箱中预培养24小时(37℃,5% CO2)。
2．每孔加入10μL的CCK溶液。
3．将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4．用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5．如果暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl溶液或者 1%w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增殖-毒性检测
1．在96孔板中配置 100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃，5%CO2)。
2．向培养板中加入10μL不同浓度的待测物质。
3．将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)。
4．向每孔加入10μL CCK溶液。
5．将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。
6．用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7．如果暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl溶液或者1%w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意事项：
1．如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。如果药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
2．用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡，否则会干扰测定。
3．建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
4．有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰OD 值读数。
5．白细胞可能需要培养较长时间。
6．当使用标准 96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔(100μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500个/孔(100μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
7．如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
8．培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

结果分析：
细胞活力*(％)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100
A(加药)：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白)：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药)：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

北京CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒厂家极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·石蜡包埋组织直接RT-PCR试剂盒(免RNA提取)
编号：BTN131176
英文名称：FFPE direct RT-PCR Kit (RNA extraction-free)
规格：30次

·柱式细菌RNA提取试剂盒
编号：BTN80103
英文名称：Bacterial RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是细菌RNA提取试剂盒(BTN51102)的柱式升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性细菌中提取总RNA。如需提取革氏阳性细菌的RNA，可以选择柱式真菌RNA提取试剂盒。跟细菌RNA提取试剂盒相比 它具有下列特点:
1. 操作更加简单快速，省去了最费时的离心步骤。
2. 所得 RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在 2.0左右.
3.一般不含基因 DNA污染。
4.适用于各种革氏阴性细菌。
5. 性价比高于进口同类产品。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	20ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在 1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的。

1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B 按 1:1的比例混合。注意：溶液A和溶液B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。一次处理1.5mL左右的细菌需要0.6mL新鲜配制的裂解液(即0.3mL溶液A和0.3mL溶液B的混合液)。
2.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
3. 吸尽液体培养基，加入0.6mL 新配制的裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
4. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL 裂解物需 0.2mL *仿)，振荡器上充分振荡混均 30秒。
5. 12000～15000g室温离心 3～5分钟。
6. 将上清液(约0.6-0.8mL)转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有 机相和中间层含有 DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下 100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
7. 12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复此步一次。
9.室温 12000～15000g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。
11.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使 用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
13. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
14. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基 互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议 最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如我们的RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如 果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA 去除剂 DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一 般都有残留 RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。


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·农杆菌AGL1化学感受态细胞
编号：BTN140382
英文名称：E.coli AGL1 Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
 AGL1菌株为C58，RecA型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA 顺利转移)。

 本产品为AGL1 农杆菌化学感受态细胞，适用于水稻、杨树、拟南芥等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达103cfu/μg。

基因型：C58 RecA(rifr/carbr)Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置5分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2～3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。(注：当平板只含有50μg/mLkan时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要28℃培养72-90小时)。


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ARB10665 人血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)含量测试 
Orth固定液   500ml
ARB14061 鲑鱼补体蛋白4(C4)含量检测 Fish c4 ELISA KIT
支链淀粉 Sudan Ⅳ 9037-22-3
BTN130580 小鼠抗GFP标签单抗 Anti GFP-Tag Mouse Mab
BL1259 核酸纯化柱(纯化)
PY02-318  3%*化*赖*酸脱羧酶试验培养基  5克  
ARB10124 人NOD样受体(NLR)血清中含量检测 Human nod-like receptor9,nlr ELISA KIT
4-*-1-*酚 Lincomycin hydrochloride 604-44-4
DN溶液(1mol/L)   100ml
ARB12169 大鼠白介素4(IL-4)定量分析 Rat interleukin 4,IL-4 ELISA KIT
ARB11334 人胎盘生长因子(PLGF)检测服务 Human placenta growth factor,plgf ELISA KIT
ARB10819 人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)酶联免疫定量检测 Human polymyositis-sclerosis antibody,pm-scl/pm-1 ELISA KIT
油红O Amid-Thin W 1320-06-5
9048-46-8 牛血清白蛋白Ⅴ Albumin BovineⅤ

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