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- 百奥莱博
- BTN100839-LIC
- 北京
- 2025年07月15日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
336
- 英文名：
Formamide，PCR Grade
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输、-20℃
- 规格：
250mg
特别提示：包括PCR级甲酰胺在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：PCR级甲酰胺
英文名称：Formamide，PCR Grade
产品货号：BTN100839
产品规格：250mg
本产品为PCR级的甲酰胺，其可以促进某些引物、模板退火，降低带有二级结构的DNA的变性温度，是一种常用的PCR增强剂。
储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。
除了PCR级甲酰胺,，我公司还供应以下相关产品：
名称：2%明胶溶液(PCR级)
货号：BTN70905
规格：1.5mL
大量实验显示一定比例的明胶能够促进PCR反应。本产品为2%的明胶溶液，按1/5到1/20(具体取决于PCR反应体系)的比例加入到PCR反应体系中，可以提高PCR的效率。
储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。
名称：即用型易错PCR试剂盒
货号：BTN101005
规格：100次
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发。易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。
产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 100μl |
| 易错PCR Mix，10× | 300μl |
| 易错PCR专用dNTP，10× | 300μl |
| MnCl2，5mM | 300μl |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。
使用方法：
1.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：
| 易错PCR Mix,10× | 3μl |
| 易错PCR 专用dNTP，10× | 3μl |
| MnCl2，5mM | 3μl |
| 自备DNA模板(10ng/μL) | 1μl |
| PCR引物(自备，10μm each) | 10pmol each |
| Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 1-5U |
| 补水到 | 30μl |
2. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件：
| PCR前变性 | 94℃ 3分钟 | |
| 易错PCR | 94℃ 1分钟 | 循环30次(见注) |
| 45℃ 1分钟 | ||
| 72℃ 1分钟 |
注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。
循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。
| PCR循环数 | 每个碱基突变几率 | PCR终产物中的突变位点数 | ||||
| 100bp | 200bp | 400bp | 800bp | 1600bp | ||
| 5 | 0.0033 | 0.00 | 0.66 | 1.3 | 2.6 | 5.3 |
| 10 | 0.0066 | 0.66 | 1.3 | 2.6 | 5.3 | 11 |
| 20 | 0.013 | 1.3 | 2.6 | 5.3 | 11 | 21 |
| 30 | 0.020 | 2.0 | 4.0 | 7.9 | 16 | 32 |
| 50 | 0.033 | 3.3 | 6.6 | 13 | 26 | 53 |
3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。
疑难解答：
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列(引物结合部分除外)，但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，对500bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q：如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。
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文献和实验用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA包括用蛋白酶K消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离DNA-蛋白质复合物，用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程，制备的基因组DNA很大，适于用高包装容量载体构建文库及通过脉冲凝胶电泳分析大片段DNA。详情请查看下列pdf文件：“用甲酰胺分离高分子质量DNA” （如果你无法在线阅读pdf文件，敬请下载安装adobe reader，官方下载，天空下载） 用甲酰胺分离高分子质量DNA 本资料来源于网络，如有异议请联系我们，我们将在3个工作日内作出处理。
荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）
放大，因此灵敏度不如间接标记的方法。实验用具及材料相关溶液的配制1）20×SSC：175.3g NaCl，88.2g柠檬酸钠，加水至1000mL（用10mol/L NaOH调pH 至7.0）。2）去离子甲酰胺（DF）：将10g混合床离子交换树脂加入100mL甲酰胺中。电磁搅拌30min，用Whatman l号滤纸滤。3）体积分数70％甲酰胺/2×SSC：35mL甲酰胺，5mL 20×SSC，10mL水。4）体积分数50％甲酰胺/2×SSC：100mL甲酰胺，20mL 20×SSC，80mL水。5）体积
在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有 RT-PCR 产物，可能有以下原因。 RNA 被降解 在用来验证完整性之前先在变性胶上分析 RNA。使用良好的无污染技术分离 RNA。在将组织从动物体取出后立刻处理。在 100％ 甲酰胺中储存 RNA 如果使用胎盘 RNase 抑制剂，不要加热超过 45℃ 或 pH 超过 8.0，否则抑制剂或释放所有结合的 RNase。而且，在≥0.8 mM DTT 时加入 RNase 抑制剂，一定要存在 DTT。 RNA 中
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