通用RT-PCR试剂盒 核酸扩增(PCR)

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北京百奥莱博供应的通用RT-PCR试剂盒 核酸扩增(PCR)用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多通用RT-PCR试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：通用RT-PCR试剂盒 核酸扩增(PCR)
品牌：百奥莱博
英文名：Reverse transcriptase Kit
编号：ALH266
产地：国产|进口
规格：50次|100次
本试剂盒是可以除去基因组DNA进行 Real Time RT-PCR 反应的专用反转录试剂。本试剂盒为一管式反转录预混Mix，5 × TRUE RT MasterMix中含有反转录第一链合所需的所有试剂（RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer）。 通常Real Time RT-PCR等实验需要先用DNase I消化去除RNA中残留的基因组DNA(gDNA) ，但是传统DNase I 处理复杂并容易造成 RNA 的降解和损失。本试剂盒中使用了具有DNA分解活性的特殊 gDNA Eraser 2-5分钟消除gDNA残留，不需要DNase 消化和后续繁琐步骤。反转录步骤采用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成，具有更高的检测效率和敏感度。

试剂盒组分(100次)：
gDNA Eraser-——————————————100μl
10×gDNA Eraser Buffer—————————100μl
5×TRUE RT MasterMix——————————400μl
RNase free H2O—————————————2ml

注意事项：
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. gDNA Eraser 、5 × TRUE RT MasterMix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。gDNA Eraser可以每次按照0.8μl使用，5 × TRUE RT MasterMix可以每次按照3.8μl使用，也不影响使用效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

本品别名：反转录试剂盒|通用反转录PCR试剂盒|去除基因组DNA反转录PCR试剂盒|通用RT-PCR试剂盒

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滑石粉 BES sodiu*(代"m") salt 14807-96-6
BL1386 SABC小鼠IgG-FITC/POD双标kit
*化溶菌酶 Tannase 9066-59-5
ARB10675 人血管紧张素Ⅵ(ANGⅥ)代做ELISA实验 
F040305 猪IgG抗原 Pig IgG
ARB11207 人组蛋白H2b(Histon-H2b)血清中含量检测 Human Histon-h2b ELISA KIT
Denhardt"s溶液(50×)   50ml
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L-酪*酸 L-Glutamic acid 60-18-4
PY02-002  伊红美蓝琼脂(EMB)  250克  
ARB11314 人促胰液素/分泌素受体(SR)免费代测 Human secretin receptor,sr ELISA KIT
司盘20 Ammonium formate 1338-39-2
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·高保真PCR MasterMix
编号：ALH211
英文名称：2×KOD PCR MasterMix
规格：1ml
本品用于PCR，尤其用于PCR产物的克隆，DNA片段的平滑化。是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3’→ 5’外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50 倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase 的5倍，Taq DNA Polymerase 的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。本产品包含KOD DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。本产品使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量2×KOD PCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。

单位定义：75℃活性测定条件下，在30min内摄入10nmol的dNTPs 使成为酸性不溶物时所需要酶的活性定义为1U。

储存条件：-20℃。


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·细菌RNA提取试剂盒(柱式吸附去除DNA)
编号：ALH029
英文名称：Bacterial total RNA Extraction Kit
规格：20次|50次
本试剂盒是在无*酚、*仿RNA快速提取技术基础上，又采用基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒特点：
1.完全不使用有毒的*酚，*仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
3.独特研发成功基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

试剂盒组份：

 

组份	20次	50次
TE (PH8.0)	6ml	6ml
溶菌酶	20mg	20mg
裂解液RLT Plus	10ml	25ml
去蛋白液RW1	15ml	40ml
漂洗液RW	5 ml	10ml
RNase-free H2O	10ml	10ml
吸附柱和收集管	20套	50套
基因组DNA清除柱和收集管	20套	50套

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到100%无残留），本试剂盒提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术，绝大多数DNA 已经被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup),请联*(代"系")我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱上进行DNase I处理。请联*(代"系")我们索取具体操作说明书。
5. RNA 纯度及浓度检测:
完整性： RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA 不纯。
浓度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free 水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40

储存条件：室温，有效期6个月

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