北京DOP-PCR试剂盒价格厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京DOP-PCR试剂盒价格厂家的品牌：百奥莱博，是优质的基因结构和功能产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多DOP-PCR试剂盒等基因结构和功能产品请联系我司咨询订购。

名称：北京DOP-PCR试剂盒价格厂家
规格：50次
品牌：百奥莱博
编号：BTN111109
英文名：Degenerate Oligonucleotide Primer PCR Kit
DOP-PCR即简并寡聚核苷酸引物PCR，是扩增全基因组的方法之一，它利用中间含有6个随机碱基的22nt引物，通过两轮PCR(第一轮低温复性，第二轮高温复性)而将模板DNA扩增。DOP-PCR扩完整基因组的效率不如利用phi 29 DNA聚合酶的MDA，但在扩增高度降解的痕量DNA 方面具有巨大优势，在法医鉴定领域具有重要应用。本产品就是在DOP-PCR基础上进行优化而开发。

产品特点：
1. 专门用于高度降解的DNA，方便，含有除模板DNA和引物以外的所有成份，简化了准备工作。
2. 优化的引物浓度，使自连序列和非模板相关序列的合成。
3. 使用高保真酶，降低突变率。
4. 长度在300-1700bp 之间，平均500bp左右。
5. 模板基因DNA 用量一般为10-100pg。
6. 所得PCR产物可用于STR 多重扩增、比较基因组杂交、单染色体文库构建、基因组图谱研究等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
DOP-PCR Magic Mix	750μl
DOP-PCR引物(20pmol/μL)	250μL
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存，保存期限为12个月。不要反复冻融。

使用方法：

1.在一干净的PCR 管中，加入下列成分：

成分	阴性对照	样品
DOP-PCR MagicMix	25μL	25μL
基因组DNA模板(自备)或单个细胞	不加	10-100pg(或一个单个细胞)
DOP-PCR引物(20 pmol/μL)	5μl	5μl
补水到	50μl	50μl

2. 放入PCR仪中按下列参数进行DOP-PCR。

预变性	95℃	5min
第一轮PCR(12个循环)	94℃	1min
	30℃	1.5min
	72℃(30℃升到72℃的时间设定为3分钟)	3min
第二轮PCR(35个循环)	94℃	1min
	62℃	1min
	72℃(每次循环后此步的保温时间延长14秒)	2min
延伸	72℃	7min
	4℃	Forever

3.结束后取5-10μl直接上样电泳(不需要额外再加DNA上样液)，红色染料电泳速度相当于50bp DNA片段。DOP-PCR产物的长度一般在300-1700bp之间。
4. 所得DOP-PCR产物可以用于后续PCR检测或其他分析。

更多有关北京DOP-PCR试剂盒价格厂家的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·DNA嵌套缺失试剂盒
编号：BTN100213
英文名称：DNA Nested Deletion Kit
规格：10次
本产品是在Henikoff方法的基础上改良而得。最常见的DNA嵌套缺失方法是利用ExoⅢ等外切酶从线状DNA的一端连续切除核酸，最后环化得到可以转化的质粒。该方法最早由Henikoff在Putney的方法的基础上发明，其流程图如下：


产品特点：
1．不需要使用超螺旋的质粒和任何限制性内切酶，非常皮实。
2．一站式，用户只需要提供质粒，不需要单独准备其他试剂。
3．一管式，不需要任何纯化和回收的处理。
4．提供阳性对照质粒，便于在遇到困难时分析原因。
5．得到的片段可以用于侧序和蛋白结合位点的分析等试验。

试剂盒组成：

成份	规格
DNA聚合Buffer	1mL
DNA酶切Buffer	1mL
酶切终止Buffer	1mL
DNA连接Buffer	1mL
T4 DNA聚合酶	10μL
T4 DNA Ligase	10μL
Exo Ⅲ	10μL
S1核酸酶	10μL
对照模板质粒	10μg
超纯水	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用效果：
将5μg变性的质粒DNA与特异的引物混合，用T4 DNA聚合酶进行全长合成，然后用ExoⅢ酶切，在不同时间点取样，得到单向酶切产物，然后用绿豆核酸酶去掉单链DNA，最后用DNA连接酶将DNA自身环化，最后转化细菌。

图注：用本产品处理含有2.5 KB插入片段的质粒，两边为1Kb DNA marker。中间6条带从左到右分别为ExoⅢ处理0、1、2、3、4和5分钟的DNA(S1核酸酶处理后才上样电泳)


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·柱式腐殖酸清除剂
编号：BTN60801
英文名称：Column Humic Acid Scavenger
规格：30次
用绝大多数文献报道的方法从土壤或湖海沉积物中提取的DNA都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染，用百奥莱博的土壤DNA提取试剂盒从泥碳(腐殖酸含量超过50%)等腐殖酸丰富的土壤样品中提取的DNA也有腐殖酸污染，它们往往对PCR等后续反应有极大的抑制作用。本产品专门用于从土壤DNA样品中清除腐殖酸污染。

产品特点：
1.去污染效果好，能使腐殖酸的浓度降低10倍以上。
2.DNA回收率高，一般都在80%以上。
3.操作过程简单快速，只需要10分钟。
4.扩容性好，可小规模操作，也可以大规模操作。
5.处理后的样品原液或稍微稀释后即可用于PCR。

试剂盒组成：

成分	规格
专用上柱液	9ml
离心吸附柱	30套
通用洗柱液	30ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1.将0.3mL专用上柱液与50μl或50μl以下的含腐殖酸的DNA溶液轻柔混匀。如果DNA溶液体积超过50μl，专用上柱液的体积需按1:6(DNA溶液:专用上柱液)的比例相应增加。不要剧烈震荡，否则DNA容易断裂。
2. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，放于离心管架上，静置3～5分钟，12000～15000g离心1分钟并倒掉收集管中的液体。若一次加不完，可分两次加入并离心。
3. 加入0.5mL通用洗柱液于离心柱中，12000～15000g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。
4. 重复第3步操作1次。
5. 12000～15000g离心1分钟以去除离心柱中的残留液体。
6. 将离心柱置于一新的干净的离心管(自备)中，加入50μl通用洗脱液，静置3～5分钟，12000～15000g离心1分钟。
7.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。

使用效果：

图注：从泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本产品处理前(B)和处理后(A)的颜色对比。处理前OD340为4.0(4为所用分光光度计的上限，实际读数可能远高于4)，处理后降低到0.3。处理前的原液、10倍和100倍稀释液均无PCR扩增，而处理后均可以扩增。

疑难解答：
Q: 如何判断提取的DNA没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR扩增。
Q: 腐殖酸的最大吸收波长是多少？
A：腐植酸(humic acid)是一大类呈棕黑色或黑色的物质,其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同。有的土壤的腐殖酸的最大吸收波长在260nm(见Appl. Environ. Microbiol.，63：4993，1997)，有的则在340nm，所以用特定的波长测定OD值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigma，Fluka等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。
Q:是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品(已知的不含污染的DNA)能够发生，说明可能有抑制作用。
Q：除本方法外，还有什么有效方法去除DNA样品中的腐植酸？
A：可以先电泳，然后用超大片段胶回收试剂Magic Gel DNArc(BTN60706)纯化DNA，如此得到的DNA原液一般可以直接扩增。
Q：本产品与柱式DNArc有何区别？
A：本产品由柱式DNArc改进而来，主要区别一是使用了不同的上柱液，减少了硅胶膜对DNA的非特异吸附，更适用于微量DNA样品；二是上柱液中含有腐殖酸去除试剂，适合于土壤DNA样品。
Q：在用土壤DNA进行细菌专一性PCR时，为何没加DNA模版的阴性对照有扩增产物出现？
A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了E.coli的基因组DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。


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