T4多聚核苷酸激酶(无3′磷酸酶活性)

特别提示：包括T4多聚核苷酸激酶(无3′磷酸酶活性)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4多聚核苷酸激酶(无3′磷酸酶活性)
英文名称：T4 Polynucleotide Kinase
产品货号：MT0094
产品规格：200U|2000U

T4多聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链DNA或RNA）的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷上。T4多聚核苷酸激酶还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。该酶经修饰后，其3′磷酸酶活性缺失，但仍保留了所有激酶的活性。

产品应用：
·DNA或RNA 5′末端的磷酸化，以便进行连接反应。
·DNA或RNA的末端标记，用作探针和进行DNA测序。
·将3′端已经磷酸化的单核苷酸5′磷酸化，制备pNp底物，用于添加到DNA或RNA的3′端。
·对3′端有磷酸基团的寡核苷酸的5′端进行标记。

产品组成：

组分	200U	2000U
T4 Polynucleotide Kinase(10U/μl)	20μl	200μl
10×T4 PNK Buffer	1ml	1ml×2
10mM ATP	100μl	500μl

保存条件：-20℃可保存3年。

单位定义：1 单位指 37℃条件下，30 分钟内催化1nmol 酸不溶性[32P] 掺入所需要的酶量。

使用注意事项：
1．1×T4 PNK Buffer：70mM Tris-HCl pH 7.6，10 mM MgCl₂，5 mM DTT，37℃ 温育。
2．热失活：65℃ 加热 20 分钟。
3．在放射性标记实验中，可用1× T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50pmol的γ-[32P] ATP和20单位的酶37℃温育30分钟。
4．T4多聚核苷酸激酶需要ATP才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含ATP。因此在磷酸化修饰核酸时请单独添加终浓度0.5～1mM ATP。
5．要提高平齐末端或5’凹陷末端的磷酸化效率，可在加入T4多聚核苷酸激酶前，先将DNA溶液于70℃加热5分钟，然后冰上冷却，并加入5%（W/V）的PEG-8000。
6．一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中37℃ 温育30分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它DNA片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活T4多聚核苷酸激酶。

除了T4多聚核苷酸激酶(无3′磷酸酶活性),，我公司还供应以下相关产品：



名称：Klenow片段
货号：YT406
规格：100U
Klenow片段是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)。来源于大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA 基因片段。

Klenow片段保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性和3"→5"外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5"→3"外切酶活性。Klenow Fragment的3"→5"外切酶活性保证了其合成DNA时的准确性(proofreading)。

特点：对于5"突出或3"突出的粘末端都可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。

用途：双链DNA 5"突出(5"overhang)末端的补平(fill-in)；双链DNA 3"突出(3"overhang)的打平(也称削平)；5"突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序；cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。

分子量：约68kDa(单体)。

活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。

酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。

纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。

酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2，10mM DTT。

储存条件：-20℃

名称：BsmAI限制性内切酶
货号：SV0190
规格：5KU|1KU|500U
在不同反应缓冲液的活性
BalbBuffer 1.1: 50%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 100%
特性
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件
CutSmart 缓冲液，55℃。
浓度
5,000units/ml。
37℃ 时活性
50%。
甲基化敏感性
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项
BsmAl是Alw26l的完全同裂酶。
在 65℃ 温育活性为 10%。

名称：MspI限制性内切酶
货号：SV0500
规格：25KU|25KU|5KU|5KU|2500U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 75%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 50%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
浓度:
20,000和100,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
Mspl是Hpall的完全同裂酶。

名称：PciI限制性内切酶
货号：SV0584
规格：1KU|200U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 50%
BalbBuffer 2.1: 75%
BalbBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 50*%
特性:
重组酶。
反应条件:
BalbBuffer 3.1，37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
Pcil是BspLU11l的完全同裂酶。
*在该缓冲液中可能出现星号活性。

名称：ZraI限制性内切酶
货号：SV0789
规格：1KU|200U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 25%
BalbBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
Zral是Aatll的不完全同裂酶。

名称：DNA 促旋酶（E. coli）
货号：SV1096
规格：500U|100U
特性:
向 DNA 引入负超螺旋
概述:
DNA 促旋酶（E. coli）是一种 II 型拓扑异构酶，在 ATP 存在下向 DNA 中引入负超螺旋。促旋酶全酶是由两个 gyrA 亚基（97 kDa）和两个 gyrB（90 kDa）亚基组成的异源四聚体。
来源:
克隆有 gyrA 和 gyrB 基因的 E. coli 菌株。
反应条件:
1X DNA 促旋酶（E. coli）反应缓冲液
[35 mM Tris-HCl，24 mM KCl，4 mM MgCl2，2 mM DTT，1.75 mM ATP，5 mM 亚精胺，0.1 mg/ml BSA，6.5% 甘油（pH 7.5 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 20 分钟。
质保声明:
DNA 促旋酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们咨询。
单位定义:
1 单位是指在 30 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟内催化超过 95% 的 0.5 μg 底物（N0471）转变为超螺旋质粒所需的酶量。DNA 超螺旋化通过不含溴化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。
浓度:
5,000 units/ml。

名称：Klenow片段
货号：JN0076
规格：250U
  本品是DNA聚合酶I的N末端截短物，它保留了DNA聚合酶活性，但缺乏单链特异的3"-5"外切酶活性以及双链特异性5"-3"外切酶活性。常用来补齐双链DNA的3"端凹陷，或应用于随机引物标记及测序等分子生物学实验。

产品用途：
1、用随机引物制备探针；
2、随机引物法标记；
3、cDNA第二条链的合成。

使用建议：Klenow Fragment（3´→5´exo-）因去除了 3´→5´核酸外切酶的活性，故不适用于生成平末端的反应。

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：在37℃条件下，30min内使10 nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

热失活：72℃，20分钟。

储存条件：-20℃