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文献和实验g/mL 无 DNA 酶的 RNA 酶,37 ℃ 温育 1 h,以除去残留的 RNA。6. 重复步骤 4、5。1 g 细胞大约能提取到 2 mg DNA。(二)从植物组织中提取基因组 DNA【实验试剂与器材】1. CTAB 抽提液:2% (w/v) CTAB (十六烷基三甲基溴化铵),100 mM Tris.Cl,pH8.0, 20 mM EDTA,pH8.0,1.4M NaCl2. CTAB/NaCl 溶液:10% CTAB,0.7M NaCl配制方法:在 80 mL 双蒸水中溶解 4.1 g
稀释液为pH4.5。 2、室温下边搅拌(磁力搅拌器或电功搅拌器),边缓慢滴加辛酸(25ml/L血清稀释液),滴加完后继续搅拌30min。 3、离心(10000r/min,30min),收集上清夜,弃去沉淀。 4、上清液用多层纱布过滤。 5、按1/10体积加入10×PBS,用5mol/L NaOH调至PH7.4。 6、上清液4℃预冷,计算溶液总体积,在4℃按277g/L加入硫酸铵粉沫(45%饱和度),边加边搅拌,加完后继续搅拌30min。 7、离心(5000r/min,15min)),弃去上清
抗生物素蛋白6.6麦胚凝集素9.9三、待标记蛋白质最适稳定量的测定 (1)光电比色法:制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液(1ml),分别加入5ml胶体金中,迅速混匀,然后,各加入1ml 10% NaCl溶液,摇匀,静置5min后测各管。根据胶体金颗粒的大小,OD在520~580nm之间测定,以OD值为纵坐标,蛋白质用量为横坐标作一曲线,取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。图5.2中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适稳定量为45μg/ml。 图5-2 蛋白最适稳定
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