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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
150
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
750KU|100KU
特别提示:包括T7 DNA 连接酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:T7 DNA 连接酶
产品货号:SV1028
产品规格:750KU|100KU
特性:
仅用于连接粘性末端
dsDNA 切刻修复
概述:
T7 DNA 连接酶来源于 T7 噬菌体,它是一种 ATP 依赖型双链 DNA 连接酶,该酶可催化双链 DNA 相邻 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基基团之间形成磷酸二酯键。T7 DNA 连接酶可以有效地催化粘性末端和切刻的连接。与 T4 和 T3 DNA 连接酶不同,T7 DNA 连接酶不能有效地催化平末端连接。因此,在实验过程中,当平末端和粘性末端同时存在时,仅需粘性末端发生连接,T7 DNA 连接酶是理想的选择。
来源:
重组 E. coli 质粒,含有 T7 DNA 连接酶编码基因。
反应条件:
1 X T7 DNA 连接酶反应缓冲液
[66 mM Tris-HCl,1 mM ATP,10 mM MgCl2,1 mM DTT,7.5% PEG 6000 (pH 7.6 @ 25℃)],25℃ 温育。
质保声明:
T7 DNA 连接酶经过严格的质量控制检测,以确保最高的纯度和反应效率。详情请联系我们咨询。
单位定义:
1 单位是指在 20 μl 总反应体系中,1 X T7 DNA 连接酶反应缓冲液条件下,25℃ 温育 30 分钟,能使 50% 的 100 ng 经 HindIII 消化的 λDNA 片段连接所需的酶量。
浓度:
3,000,000 units/ml。
注意事项:
ATP 是必需的辅助因子。
当某些实验不能用 PEG 6000 时,可使用 T4 DNA 连接酶缓冲液,但活性会降低 10 倍。切记反应时体系内一定要有终浓度为 1 mM 的 ATP。
65℃ 加热 10 分钟可使 T7 DNA 连接酶失活。如果反应缓冲液中含有 PEG,该酶不能加热失活,否则会抑制后续转化实验。
除了T7 DNA 连接酶,,我公司还供应以下相关产品:
名称:Therminator II DNA聚合酶
货号:BTN131196
规格:100U
Therminator II DNA聚合酶是9°Nm DNA聚合酶中的一种,但有较强的修饰底物掺入能力,如dNTP、rNTP和acyNTP。Therminator II DNA聚合酶是Therminator DNA聚合酶的衍生物,前者比后者多了一个氨基酸突变。这种改变提高了rNTP和3′功能基团经修饰核苷酸的掺入效率。
产品特点:
1.提高了修饰核苷酸特别是rNTP的掺入能力;
2.部分核糖核酸置换法测定DNA序列;
3.ddNTP或acyNTP的链终止法测序;
4.ddNTP或acyNTP链终止法测序用于SNP分析。
产品组成:
| 成份 | 规格 |
| Therminator II DNA聚合酶(2000U/mL) | 50μL |
| 10×Buffer | 1.5mL |
| 使用手册 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位指75℃条件下,30分钟内使10nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
名称:AgeI限制性内切酶
货号:SV0027
规格:1,500U|300U|150U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 75%
BalbBuffer 3.1: 25%
CutSmart Buffer: 75%
特性:
重组酶。
反应条件:
BalbBuffer 1.1,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
5,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
延时酶切条件下可能出现星号活性。
名称:AvaI限制性内切酶
货号:SV0068
规格:10KU|10KU|2KU|2KU|1KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: <10%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 25%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000和50,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
Aval的耐热完全同裂酶是 BsoBl。
名称:EciI限制性内切酶
货号:SV0332
规格:500U|100U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1: 50%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
2,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
建议温育时间不超过 4 小时。
延时酶切条件下可能出现星号活性。
名称:XbaI RE-Mix限制性内切酶
货号:SV0773
规格:150次
特性:
预混液、重组酶、省时酶。
反应条件:
20 μl反应体系中加入 Xbal RE-Mix和DNA,37℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。
甲基化敏感性:
对 dam甲基化敏感。
名称:Nt.BbvCI切刻内切酶
货号:SV0799
规格:5KU|1KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 50%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
名称:Bst2.0 WarmStart DNA 聚合酶
货号:SV0937
规格:8KU|8KU|1600U
特性:
最佳 DNA 等温扩增(LAMP)性能
快速聚合
反应条件灵活,比 Bst DNA聚合酶具有更高的盐耐受力
6 0 - 7 2℃ 之间具有最佳反应性能(WarmStart)
用 dUTP 替换 dTTP 对其几乎无影响
WarmStart DNA聚合酶可以在室温下建立反应,防止非特异性扩增,提高反应效率
概述:
Bst 2.0 DNA聚合酶是 Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶 I,大片段(Bst DNA聚合酶,大片段)的同源物,并由电脑模拟设计完成。Bst 2.0 DNA聚合酶具有 5´→3´的聚合酶活性和强链置换活性,但没有 5´→3´ 核酸外切酶活性。和野生型 Bst DNA聚合酶,大片段相比,该酶可有效提高扩增速度、产量、耐盐性和热稳定性等。
Bst 2.0 WarmStart DNA聚合酶在等温聚合酶中是独有的。像“热启动”PCR聚合酶一样,这种特性在低于最适反应温度下可以抑制酶活性。因此,实验操作可以在室温下进行,并可以消除非特异性反应产物,提高反应效率。
我公司的 Bst 2.0 WarmStart DNA聚合酶利用了核酸适配体技术。适配体是一种经过广泛修饰的特定核苷酸,通过非共价键作用结合到聚合酶上,从而在非许可温度下抑制酶活性(<50℃)。另外,Bst 2.0 WarmStart DNA聚合酶不需要单独的激活步骤。
Bst 2.0 WarmStart DNA聚合酶可以消除在室温条件下建立反应时,产生的非特异性的扩增,而传统的 Bst DNA聚合酶或同源物可以在无模板的情况下,掺入核苷酸。
名称:cAMP 依赖性蛋白激酶(PKA)
货号:SV1578
规格:500KU|100KU
概述:
可逆性地在蛋白质上添加磷酸基对真核细胞信号转导起着重要作用,蛋白*酸化和去磷酸化参与调节细胞活动的各个方面。随着已知蛋白激酶数量飞速增长,确定细胞中哪种蛋白激酶与哪种底物相互作用就变得更具挑战性。通过对比磷酸化位点的氨基酸序列与已知底物序列来找到的共有磷酸化位点序列已被证实是一种有效方法,这些序列有助于预测潜在的蛋白质底物中特定蛋白激酶磷酸化位点。
由于决定蛋白激酶特异性涉及复杂的三维结构,这些较短的氨基酸序列只描述了磷酸基接受位点周围的一级结构,因此把问题简单化了(见综述 1),没有考虑到二级及三级结构,也没有考虑到其它多肽链或者同链中位置稍远处的因素,此外,在特定序列中并不是所有残基对于激酶的识别及磷酸化具有同等影响,因此,使用这些序列时应该慎重。
另一方面,这些共有序列已经被证实是识别的关键序列,简单化了的序列使得它们在研究蛋白激酶与其底物中更有用。基于共有序列合成的寡肽,除了能预测磷酸化位点以外,往往还是蛋白激酶活性测定的理想底物。
下表列出了 我公司提供的蛋白激酶特异性序列,磷酸基接受位点用红色标出,可以进行功能替换的氨基酸用斜杠(/)标出,对识别贡献不大的氨基酸用“X”表示。
某些蛋白激酶在它们的识别序列中包括磷酸氨基酸残基,被称为“hierarchical”白激酶(见综述 3),如:CKI 和 GSK-3。它们通常需要另一个激酶预先在它们自己的磷酸化位点附近磷酸化,S(P)表示这种预先存在的丝氨酸残基。
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文献和实验。 由此题我发现,目的基因由两种限制酶切割,一端由EcoRI切出黏性末端,另一端由AluI切出平末端;载体质粒由两种限制酶切开,一端由EcoRI切出黏性末端,另一端由SmaI切出平末端。在构成重组 质粒时,两个黏性末端碱基互补,由DNA连接酶可以连接上磷酸二酯键,这没有疑议。但是另一端两个平末端也能由DNA连接酶连接上,并且原题中第(3)问“图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求? 。”答案为“否”。 也就是由此题我们可以得出一个结论:DNA连接
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huahualian7 急急急问:DNA复制时连接冈崎片断的酶是聚合酶还是连接酶? 谢谢啊! zhujoker 聚合酶 yuxiongying DNA聚合酶1填补冈崎片段引物切除后的空隙,然后连接酶连接两个相邻的冈崎片段 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴 师兄微
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