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- 上海烜雅
- XY-MY-0094
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- 2025年10月20日
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WIP(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation)
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详询
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-20°C保存，一年有效
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上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
20
| 【产品介绍】 一. WIP组织细胞裂解液使用说明书 产品简介 WIP组织细胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation )，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本产品裂解细胞获得的裂解产物，可用于PAGE，蛋白印迹（Western Blot），免疫沉淀(immnolprecipitation，IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白与多肽的分离纯化。 WIP裂解液的主要成分为Tris(pH 7.5，20mM)，150mM NaCl，去垢剂Triton X-100以及多种蛋白酶抑制剂,无需自备PMSF、磷酸酶抑制剂等蛋白酶抑制剂。WIP不仅可以用于细胞培养物的裂解，也可直接用于大多数动物组织的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时，可强烈地抑制蛋白、多肽的降解，并保持原有的分子结构和蛋白间相互作用。 用WIP裂解得到的组织细胞蛋白样品，可以用博奥森生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford试剂盒测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 包装清单 WIP组织细胞裂解液 30ml PMSF（100X） 0.3ml 保存条件： -20°C保存，一年有效。 注意事项： 1．为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。 2．PMSF应现用现加。 3．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4°C进行。 4．蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健结构咨询。 二.使用方法说明 1．培养细胞 取出WIP裂解液，待融化后，颠倒混匀数次，适量分装冻存。在使用前取出，按比例加入PMSF（使其最终浓度为1mM），混匀，立即使用。 贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入WIP。用枪吹打数下，使WIP和细胞充分接触。通常WIP接触细胞数秒后细胞就会被裂解。 悬浮细胞，收集培养细胞，离心去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)，用手指把细胞用力弹散，按6孔板每孔细胞加入100-200微升的比例加入WIP。如果细胞数量较大，应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加WIP。用手指轻弹管底以促进WIP和细胞充分接触，裂解完全时应无明显的细胞颗粒。 裂解物经10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。 2．组织样品 取Ep管，分别称重标记，把组织剪切成小块装入Ep管中，称重。按每20毫克组织加100-200微升的比例加入WIP(如裂解不完全，可以适当增加WIP的用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当减少WIP的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 如果组织样品本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入WIP裂解，通过振荡（Vortex）以使样品裂解完全 |
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文献和实验流式细胞技术（Flow cytometry, FCM）是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物，它能有效地从单细胞水平区分异质性细胞群体，检测对象包括但不限于悬浮细胞、贴壁细胞或从实体组织分离的单细胞悬液和其他生物颗粒。 一、细胞表面染色步骤 样本准备 1.1 采集全血或组织（脾，淋巴结，胸腺和骨髓），用细胞染色buffer(或含1%BSA的PBS)制成单细胞悬液。对于体外
肿瘤情况，又兼具了细胞系的可传代、易于高通量筛选等特性。因此，CRC 类器官模型正在广泛应用于药物研究、个性化医疗等领域。 本篇文章基于 Nature Chemical Biology【4】、STAR protocols【5】、Nature protocols【6】和 Cell【7】发表的四篇文章，整理了人类结直肠癌组织来源的类器官培养方案。 图 1. 病人组织来源的 CRC 类器官研究方案【8】 细胞来源 活检样本或手术样本 培养基配方 解离培养基 类器官培养基 红细胞裂解液
。pRL-TK载体pRL-TK （图9），在Rluc上游含有单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶 （HSV-TK） 的启动子区域。HSV-TK启动子在胚胎和成熟的哺乳组织细胞中，可低水平和组成型地表达。pRL-SV40载体pRL- SV40含SV40早期增强子/启动子区域，在多种细胞中，可高强度、组成型表达Rluc。载体pRL-40还含有SV40的复制起始区，在诸如COS-1或COS-7细胞中，可瞬时、附加体式地复制，表达SV40大抗原。pRL-CMV载体pRL-CMV含CMV早早期增强子/启动子区域， 在多种
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