- ¥180
- 江蓝纯
- R0030
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 供应商：
江蓝纯
- 规格：
100ml
非变性组织/细胞裂解缓冲液内含非离子型去垢剂，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。
使用说明：
根据使用量，取每 1ml 裂解液加入 10ul PMSF，使 PMSF 的终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔加入 150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，冰上放置裂解 5-10 分钟。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液，冰上放置裂解 5-10 分钟。期间可以用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
充分裂解后，将裂解后的样品 10000-14000g 离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀、免疫共沉淀等操作。
注意事项：
为取得佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。裂解时间可根据实验要求进行优化处理。
非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验和靶蛋白 Y 来自细胞裂解液，那么裂解液配方建议选择非变性裂解液，NaCl 浓度＜150 nM，SDS 浓度＜0.2% 洗涤液---去除非特异结合蛋白，顾及互作蛋白间的结合强度优化配方 如果互作蛋白作用较弱，建议选择 PBS 或者 TBS 进行洗涤 通常会加入去垢剂降低背景，比如 0.5-1% NP-40/TritonX-100/CHAPS 如果效果还不佳，还可增加盐离子浓度，比如＜250 nM NaCl，以及加入1-2 nM DTT/β-ME 还可增加洗涤次数，比如 3-5 次 洗脱液---
需新鲜加入，加入后先煮 10 分钟。2. 细胞裂解液 (1X): 20 mM Tris (pH 7.5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton X- 100, 2.5 mM sodium pyrophosphate, 1 mM β-glycerophosphate, 1 mM Na3VO4，1 μg /ml Leupeptin.注意：使用之前加入 1 mM PMSF。3. 蛋白 A 琼脂糖微球：取 1.5 g 蛋白 A 琼脂糖微球加入
交叉污染；可胜任转录活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等。组成： (100 次制备 ,每次可用于 5-10 ´ 106 细胞)胞浆蛋白提取缓冲液 A 50 ml 胞浆蛋白提取缓冲液 B 2 x 1.5 ml 核蛋白提取缓冲液 10 ml 4.变性 / 非变性细胞裂解产物制备试剂盒 (CellysateTM preparation Kit)C1054 50次制备 160元100 次制备 280元介绍 : 本试剂盒包括两种细胞裂解液
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